[发明专利]ATP核酸适配体、利用纳米金显色检测ATP的方法及试剂盒

说明书

本发明提供ATP核酸适配体、利用纳米金显色检测ATP的方法及试剂盒。该ATP核酸适配体具有如SEQ ID NO：1所示碱基序列。本发明提供一种利用纳米金显色检测ATP的方法，该方法包括以下步骤：(1)使含有ATP的待测溶液与含有上述的ATP核酸适配体的检测溶液混合；(2)将步骤(1)得到的混合液与纳米金溶液混合，然后加入盐溶液并混匀；(3)仪器检测或观测步骤(2)得到的混合溶液。利用本发明的方法对ATP进行测定，不需要任何化学修饰，没有复杂的反应过程，也不需要昂贵的仪器，甚至可以通过肉眼观测，操作简便，成本低。该方法检测时间短，使用方便，灵敏度高，特异性好。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，更具体地，涉及ATP核酸适配体、利用纳米金显色检测ATP的方法及试剂盒。

背景技术

ATP作为所有生物体生存和繁殖的细胞合成中必不可少的普遍能量来源，在机体代谢过程中扮演着非常重要的角色。研究表明ATP可以作为细胞存活率和细胞损伤的指示剂。ATP在细胞中的异常浓度和许多疾病，比如肿瘤，心血管疾病，帕金森综合征等有着密切的联系。因此，对ATP快速准确的检测在临床应用上有着重大的意义。

目前已有的ATP的检测方法主要包括HPLC法、荧光素/荧光素酶法以及电泳法。这些方法的灵敏度和特异性都很好，但是需要昂贵的仪器和繁琐的操作步骤，并且耗时耗力。

核酸适配体(Aptamer)是一段DNA，RNA或者是XNA序列。通常是利用体外筛选技术-指数富集的配体系统进化技术(Systematic evolution of ligands by exponentialenrichment，SELEX)，从核酸分子文库中得到的寡核苷酸片段。核酸适配体能与多种目标物质高特异性、高选择性地结合，因此被广泛应用于生物传感器领域。相对于传统的抗原-抗体反应，核酸适配体更容易合成，更稳定，成本更低，而且拥有与抗原-抗体反应相匹敌的特异性和灵敏度。这些优势使核酸适配体成为了各种化学分子探测的有力武器。基于核酸适配体的生物传感器受到了人们越来越多的关注和研究应用。这些生物传感器主要分为：荧光法、电化学法、化学发光法以及比色法。其中比色法相对于其它方法有许多优势，比如成本低，操作简单，结果容易读取等。在未来的分析检测领域甚至临床应用方面有着很好的前景。

纳米金是指金的微小颗粒，其直径在1-100nm，其颜色依直径大小而呈红色至紫色。由于其特殊的物理化学性质，比如高消光系数、强大的距离相关的光学性质、低成本等，使其在比色法的检测手段中作为信号显示剂非常具有竞争力。

发明内容

本发明的目的是提供一种操作简单、灵敏度高、特异性好、成本低的ATP检测方法。

根据本发明的第一方面，本发明提供一种ATP核酸适配体(或称DNA探针)，该ATP核酸适配体具有如SEQ ID NO：1所示碱基序列。5’-ACCTTCCTGGGGGAGTATTGCGGAGGAAGGT-3’(SEQ ID NO：1)。

通过对ATP核酸适配体序列的优化，能够提高检测的特异性和灵敏度。

根据本发明的第二方面，本发明提供一种利用纳米金显色检测ATP的方法，该方法包括以下步骤：

(1)使含有ATP的待测溶液与含有上述的ATP核酸适配体的检测溶液混合；

(2)将步骤(1)得到的混合液与纳米金溶液混合，然后加入盐溶液并混匀；

(3)仪器检测或观测步骤(2)得到的混合溶液。

优选地，步骤(1)中，含有ATP的待测溶液中的ATP与含有ATP核酸适配体的检测溶液中的ATP核酸适配体的摩尔比为1：1-1000，优选为1：50-200。

优选地，步骤(1)中，含有ATP核酸适配体的检测溶液中ATP核酸适配体的浓度为0.1μM-10μM，含有ATP适配子的检测溶液优选为Tris-HCl缓冲液。