[发明专利]一种TTLL12基因新转录本的鉴定引物及其方法在审
| 申请号： | 201710128049.9 | 申请日： | 2017-03-06 |
| 公开（公告）号： | CN106884049A | 公开（公告）日： | 2017-06-23 |
| 发明（设计）人： | 肖莹莹;文锐玲;喻长顺 | 申请（专利权）人： | 广州金域医学检验中心有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京精金石专利代理事务所(普通合伙)11470 | 代理人： | 刘晔 |
| 地址： | 510005 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 ttll12 基因 转录 鉴定 引物 及其 方法 | ||
1.一种TTLL12基因新转录本的鉴定引物，其特征在于，包括针对TTLL12基因特异性的PCR引物：所述TTLL12基因特异性的PCR引物为：5'-GATTACGCCAAGCTTAGAGCACACAGACGGCGCGGGTG-3'。
2.如权利要求1所述的TTLL12基因新转录本的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1收集培养中的H1299细胞株，提取RNA；
S2用特异性的3'-RACE CDS引物反转录mRNA，形成cDNA链；所述反转录的条件为：阶段1：42℃，90s；阶段2：70℃，10min；阶段3：4℃，保温；
S3以步骤S2中的cDNA链作为模板，采用权利要求1的特异性性引物和UPM通用性引物扩增获得3'-RACE产物，所述PCR扩增条件包括：阶段1：94℃，30s；72℃，3min，5个循环；阶段2：94℃，30s；70℃，30s；72℃，3min，5个循环；阶段3：94℃，30s；72℃，3min，5个循环；阶段4：94℃，30s；70℃，30s；72℃，3min，5个循环；阶段5：94℃，30s；68℃，30s；72℃，3min，5个循环；阶段6：4℃，保温；
S4将步骤S3的3'-RACE产物进行琼脂糖电泳，回收3'-RACE产物，连接到载体上，进行一代测序。
3.如权利要求2所述的TTLL12基因新转录本的鉴定方法，其特征在于，所述步骤S2中的特异性的3'-RACE CDS引物为：5'-AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTAC-3’。
4.如权利要求2所述的TTLL12基因新转录本的鉴定方法，其特征在于，所述步骤S3中的UPM引物的长引物为：5'-CTAATACGACTCACTATAGGGCAAGCAGTGGTATCAACGCAGAGT-3'，所述步骤S3中的UPM引物的短引物为：5'-CTAATACGACTCACTATAGGGC-3'。
5.如权利要求1所述的TTLL12基因新转录本的鉴定引物在制备检测TTLL12基因新转录本试剂盒中的用途。
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