[发明专利]一种检测TTLL12基因新转录本的引物和方法

说明书

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，尤其涉及一种检测TTLL12基因新转录本的引物和方法。

背景技术

微管蛋白酪氨酸连接酶样(Tubulin Tyrosine Ligase Like protein,TTLL)蛋白家族有14个成员，均含有TTL结构域，具有微管蛋白的翻译后修饰功能，如酪氨酸化修饰、甘氨酸化修饰(TTLL3、TTLL8、TTLL10)、谷氨酰胺化修饰(TTLL1、TTLL2、TTLL4、TTLL5、TTLL6、TTLL7、TTLL9、TTLL11、TTLL13)，进而影响微管的稳定性。在多种癌细胞中，TTLL蛋白对微管蛋白的修饰功能会被抑制，如在肺癌及乳腺癌细胞中，只能发现丰度很低的谷氨酰胺化微管蛋白。

TTLL12是一个十分特别的TTLL蛋白家族成员，它的TTL结构域与其他成员有明显的差异，特异性TTL结构域的N端序列缺少结合ATP和镁离子的12个核苷酸序列，还缺少7个保守的结构域中的3个，国内外的最新的研究都表明它的TTL结构域不具备微管蛋白修饰酶的催化功能，其影响微管蛋白修饰的机制还不明确。

一个基因在不同的发育阶段、分化细胞和生理状态下，可以通过不同的剪切方式得到不同的mRNA和翻译产物。每个转录本可能发挥着独特的功能。因此，研究和开发基因的新转录本的方法对该基因功能的分析具有重要的作用。

CLOCK基因存在2个不同的转录本，有研究发现，CLOCK基因与不孕不育、肥胖及脂肪代谢异常、糖尿病、肿瘤、高血压疾病、急性心肌梗塞(AMI)等病理过程高度相关而且其对沙门氏菌感染抗性中发挥着重要作用。专利文献CN103436607B公开了鸡CLOCK基因不同转录本的扩增方法及其引物，该扩增方法是对每个转录本序列，设计了转录本特异引物，通过反转录PCR技术可以扩增出特定的转录本，对不同转录本功能的分析研究奠定基础，更有利于CLOCK基因功能的研究，提高CLOCK基因引起的疾病的诊断准确性。

目前，尚未见有对TTLL12基因的新转录本的报道，不利于TTLL12基因功能的研究和发现。

发明内容

为弥补现有技术中存在的缺陷，本发明提供一种检测TTLL12基因新转录本的引物和方法，该引物具有特异性好、灵敏度高等优点，用于准确的确定TTLL12基因一种新转录本的基因序列，对TTLL12基因的功能分析和研究具有重要的作用。

本发明提供一种检测TTLL12基因新转录本的引物，包括针对TTLL12基因两对特异性PCR引物：所述针对TTLL12基因第一对特异性PCR引物的正向引物为：5'-GAAGATGCCGGTGTGGTATA-3'(SEQ ID NO.1)，反向引物为：5'-CACGTCCGTGTAGACCTTGA-3'(SEQ ID NO.2)；所述针对TTLL12基因第二对特异性PCR引物的正向引物为：5'-GAGACTTTGCCTACGGAGAGA-3'(SEQ ID NO.3)，反向引物为：5'-GCTGAGTTTCCTGTAGTCCTTGA-3'(SEQ ID NO.4)。

进一步地，所述TTLL12基因两对特异性PCR引物的浓度比为1:1。

进一步地，所述TTLL12基因两对特异性PCR引物的正向引物与反向引物的浓度比为1:1。

另外，本发明还提供了一种检测TTLL12基因新转录本的方法，包括以下步骤：

S1收集培养中的A549、PC-9、SPCA-1和SK-MES-1等细胞株，提取RNA，逆转录成cDNA模板；

S2以步骤S1的cDNA为模板，采用权利要求1所述的TTLL12基因两对特异性的PCR引物进行PCR扩增；

S3将所得的PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳。

进一步地，所述步骤S2的PCR扩增条件包括：阶段1：94℃2min；阶段2：94℃，15s；58℃，15s；72℃，30s，30个循环；阶段3：72℃，5min；阶段4：12℃，保温。

此外，本发明还提供了所述的检测TTLL12基因新转录本的引物在制备检测TTLL12基因新转录本试剂盒中的用途。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明提供了一种检测TTLL12基因新转录本的引物，该引物的特异性好，准确性好，提高了检测效率。此外，本发明还提供了一种检测TTLL12基因新转录本的方法，通过使用特异性的引物，具有特异性好、灵敏度高、准确性好等优点，用于准确的检测TTLL12基因新转录本的基因序列，促进TTLL12基因的功能分析和研究。

附图说明