[发明专利]一种细胞膜修饰纳米碳球材料及其制备方法和应用有效
申请号: | 201710132304.7 | 申请日: | 2017-03-07 |
公开(公告)号: | CN107014931B | 公开(公告)日: | 2019-11-08 |
发明(设计)人: | 王娜妮;王绪平;吴人杰;寿旦 | 申请(专利权)人: | 浙江省立同德医院 |
主分类号: | G01N30/06 | 分类号: | G01N30/06;G01N30/60 |
代理公司: | 杭州丰禾专利事务所有限公司 33214 | 代理人: | 王静 |
地址: | 310007 *** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 细胞膜 修饰 纳米 材料 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种细胞膜修饰纳米碳球材料的方法,其特征在于:该方法包括以下的步骤:取纳米碳球材料,加入细胞膜悬液,所述的纳米碳球材料与细胞膜悬液的质量比为0.005~0.2:1~100;涡旋振荡5-100min,静置10-30h;5000-10000 rpm离心10-30min,沉淀用0.5-50mL缓冲盐溶液或生理盐水洗涤,制备成细胞膜修饰纳米碳球材料;
其中,细胞膜悬液的制备方法包括以下的步骤:取0.2-10g动物组织,洗净残余血液,用滤纸吸干,研碎,用5-30倍体积的缓冲盐溶液或生理盐水制备匀浆,2层纱布过滤,滤液5000-20000rpm离心10-60 min;沉淀反复匀浆2次,收集3次离心后的上清液,5000-20000rpm离心10-60 min,弃上清,沉淀用缓冲盐溶液或生理盐水冲洗两次,每次均5000-20000rpm离心10-60 min,最后得沉淀;将10-100mg沉淀用1-10mL生理盐水混悬,既得细胞膜悬液;,其中,所述纳米碳球的制备方法包括以下的步骤:称取1-10g葡萄糖,溶解于20-1000ml蒸馏水中,搅拌5-30分钟,将葡萄糖溶液转入内衬聚四氟乙烯的水热釜中,将水热釜放到电热恒温鼓风干燥箱中,在100-300℃的恒温条件下水热反应2-20h;然后自然冷却至室温,得到棕色悬浊液,离心收集产生的碳球,分别用去离子水和无水乙醇洗涤2~3 遍,最后烘干,即得到纳米碳球。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:细胞膜悬液的制备方法包括以下的步骤:取0.1-0.5%胰酶蛋白消化密度为104-108的细胞,将细胞悬液在500-10000rpm离心10-30min,沉淀加入1-20mL的生理盐水,超声100-500W处理10-60 min,取部分上清液在倒置显微镜下观察证实其已经破膜,5000-20000rpm离心10-60 min,弃上清,最后得沉淀;将10-100mg沉淀用1-10mL生理盐水混悬,既得细胞膜悬液。
3.根据权利要求1或2所述的方法制备获得的细胞膜修饰纳米碳球材料。
4.一种如权利要求3所述的细胞膜修饰纳米碳球材料作为分散固相萃取材料的应用。
5.根据权利要求4所述的的应用,其特征在于:纳米碳球选用富勒多聚糖微球。
6.根据权利要求4所述的的应用,其特征在于:细胞膜选用生物组织细胞膜或生物细胞细胞膜。
7.一种如权利要求3所述的细胞膜修饰纳米碳球材料在淫羊藿有效成分筛选方法中的应用,该方法包括以下的步骤: 1)吸附取含有5-200mg细胞膜纳米碳球的缓冲盐溶液或生理盐水混悬液0.5-20mL,与0.001-10 mL 淫羊藿提取液涡旋混合1-10min;混合物10000-20000 rpm离心10-30min,收集上清液; 2)分析将上清液经0.22μm滤膜过滤后注入分析仪器中,选择优化的分离条件,进行化学成分和含量分析;对比吸附前后淫羊藿提取物样品的化学成分和含量的改变,筛选得到有效成分群。
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