[发明专利]一种检测卡那霉素的生物传感器及其制备方法

说明书

本发明涉及生物传感器技术领域，特别涉及基于目标物诱导的核酸适配体构象变化检测卡那霉素的生物传感器。具体制备方法为：制备方法：对电极进行预处理；将HAP2层修饰到电极表面；将均相反应混合液修饰到电极表面。本发明利用了核酸适配体的特异型识别，利用卡那霉素的aptamer作为识别物质实现了对目标物卡那霉素的高特异性检测；利用核酸工具酶，实现了目标物的循环利用，起到了信号放大的作用。

技术领域

本发明涉及生物传感器技术领域，特别涉及基于目标诱导的核酸适配体构象变化和lambda核酸外切酶检测卡那霉素的生物传感器，还涉及其制备方法。

背景技术

卡那霉素是一种氨基糖苷类抗生素。对多数肠杆菌科细菌，如大肠埃希菌、克雷伯菌属、变形杆菌属、肠杆菌属、志贺菌属、沙门菌属、枸橼酸杆菌属、普罗菲登菌属、耶尔森菌属等均有良好作用；流感杆菌、布鲁菌属、脑膜炎球菌、淋球菌等对本品也大多敏感，对铜绿假单胞菌无效。对葡萄球菌属中甲氧西林敏感株和结核分枝杆菌也有一定作用，其他革兰阳性细菌如溶血性链球菌、肺炎链球菌、肠球菌和厌氧菌等对本品多数耐药性。但是卡那霉素在人类危害性高的时期可有听力及肾损害，可引起胃肠道反应：恶心、呕吐、食欲不振、腹胀、腹泻，偶有过敏反应、皮疹、药热等，严重者可有休克死亡，也可有神经系统症状，心肌抑制、呼吸衰竭等。

目前报道的检测Ka的方法包括毛细管电泳法，表面等离子体共振方法，高效液相色谱法和荧光共振方法。这些方法有特异性和灵敏度低，检测成本高，仪器操作复杂，需要专业操作人员等缺点，因此，确立一个灵敏的高选择性的方法临床诊断和在食品安全分析中检测Ka是至关重要的。

发明内容

为了解决以上现有技术中检测卡那霉素的方法特异性和灵敏度都比较低、成本高的问题，本发明提供了一种特异性和灵敏度高、成本低、检测速度快的基于目标物诱导的核酸适配体构象变化检测卡那霉素的生物传感器。本发明还提供了基于目标物诱导的核酸适配体构象变化检测卡那霉素的生物传感器的制备方法。

本发明是通过以下步骤得到的：

本发明中一共用到了4条DNA链，其序列分别是：

Helper：5′-AGGAGTGGGGGTTGAGGCTAAGCCGAATTC-3’ （SEQ ID NO:1）；

Primer：5’-GAATTCGGCCCACTCCT-3’(SEQ ID NO:2)；

HAP1：5’-P-AGGAGTGGGCCGAATTCTCCTCAGCT-3’ (SEQ ID NO:3)；

HAP2：5’-AACCCGAAGCTGAGGAGGGTAGGGCGGGTTGGGTTT-SH-3’ (SEQ ID NO:4)。

本发明中用到了两种酶：Nb.BbvCI限制性核酸内切酶，Lambda核酸外切酶。Lambda核酸外切酶是一种高持续性核酸外切酶，作用于双链DNA，沿5’→3’方向逐步切去双链DNA中5’修饰了磷酸基团的单链中的单核苷酸。Nb.BbvCI可以在特异性位点实现对DNA双链的特异性切割，其特异性的切割识别序列是：5’-GC↓TGAGG-3’。

本发明中卡那霉素的检测是在均相溶液中实现的，通过两步循环的方式来实现信号的放大，从而实现卡那霉素的高灵敏检测，并获得较低的检测下限。