[发明专利]一种博来霉素族衍生物的微生物发酵制备方法

权利要求书

1.一种博来霉素族衍生物的微生物发酵制备方法，其特征在于：该博来霉素族衍生物的微生物发酵制备方法的具体步骤如下：

S1：在轮枝链霉菌菌种的新鲜斜面加入10ml无菌水，刮下白色孢子层后，所得的悬浮液经过滤后振荡2min，制得单孢子溶液；

S2：利用滴定管吸取10ml单孢子溶液于无菌平板中，采用紫外线照射后，将其均匀涂布于无菌平板中培养，制备出耐性菌株；

S3：将耐性菌株接种至含有发酵培养基的三角瓶中，摇瓶发酵；

S4：将发酵后产生的发酵液经过过滤后用微量注射器各取上清液15μL，并滴于圆形层析滤纸小片上，且纸片贴在鉴定菌的培养板上，在37℃环境下培养14～20h，并取抑菌圈较大者进行复筛；

S5：利用HPLC色谱分析方法选取目标产物生产能力较高的菌株，并转接于发酵培养基中，装液量为50mL的三角瓶，在30℃、170r·min^-1的条件下摇床培养60～70h，得到作为发酵培养的种子液；

S6：以10％接种量将所得种子液接种到发酵培养基中进行摇床培养，发酵体系为300mL三角瓶装液量为50mL，在30℃、200r·min^-1的条件下摇床培养6d；

S7：发酵结束后，收集发酵液，用10倍体积甲醇振荡浸提24h后，将甲醇浸提液放入真空干燥箱中烘干后既得。

2.根据权利要求1所述的一种博来霉素族衍生物的微生物发酵制备方法，其特征在于：所述步骤S2中，在采用紫外线照射时，紫外线发光光源为30W，260A，紫外线光源的照射距离为30cm。

3.根据权利要求1所述的一种博来霉素族衍生物的微生物发酵制备方法，其特征在于：所述步骤S3中，发酵培养基为淀粉、糊精、大豆粉、葡萄糖、玉米浆、黄豆粉、酵母粉、硫酸铜和硫酸锌的混合物，其PH值为6.5～7.0。

4.根据权利要求1所述的一种博来霉素族衍生物的微生物发酵制备方法，其特征在于：所述步骤S4中，鉴定菌为枯草杆菌。

5.根据权利要求1所述的一种博来霉素族衍生物的微生物发酵制备方法，其特征在于：所述步骤S5中，在采用HPLC定量分析中，液相色谱条件为色谱柱YWG，C₁₈，10μm，250×4.6mm。

6.根据权利要求1所述的一种博来霉素族衍生物的微生物发酵制备方法，其特征在于：所述步骤S7中，真空干燥箱的功率为3～5KW，烘干温度为90～110℃。