[发明专利]一种用于角膜疾病治疗的上皮细胞片的制备方法及其应用在审
| 申请号： | 201710144019.7 | 申请日： | 2017-03-10 |
| 公开（公告）号： | CN108567995A | 公开（公告）日： | 2018-09-25 |
| 发明（设计）人： | 薛琦;石躍由佳;吴复跃;何振东 | 申请（专利权）人： | 上海睿泰生物科技股份有限公司;合肥欣睿生物科技有限公司 |
| 主分类号： | A61L27/38 | 分类号： | A61L27/38;A61L27/50;C12N5/071 |
| 代理公司： | 上海专利商标事务所有限公司 31100 | 代理人： | 张静 |
| 地址： | 200072 上海市*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 口腔黏膜 上皮细胞 制备 成纤维细胞 口腔黏膜组织 上皮细胞培养 上皮细胞提取 分离步骤 角膜疾病 培养材料 支架制备 组织工程 基质 采集 治疗 应用 | ||
1.一种用于角膜疾病治疗的上皮细胞片的制备方法，包括以下步骤：
(a)口腔黏膜组织采集步骤；
(b)口腔黏膜上皮细胞提取步骤；
(c)口腔黏膜成纤维细胞提取步骤；
(d)上皮细胞培养基质和培养支架制备步骤；
(e)口腔黏膜上皮细胞与口腔黏膜成纤维细胞共培养步骤；以及
(f)制备得到的上皮细胞片与同培养材料的分离步骤。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(b)中口腔黏膜上皮细胞采用Ⅰ型中性蛋白酶联合胰蛋白酶进行消化。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(c)中口腔黏膜成纤维细胞采用经Ⅰ型中性蛋白酶消化后的结缔组织块贴附培养法培养提取。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(d)中的上皮细胞培养基质包含1IU/ml的凝血酶以及1-1.6mg/ml的纤维蛋白原。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(d)中的培养支架是外径为23毫米、内径为18毫米的O型圈。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(e)中口腔黏膜上皮细胞与口腔黏膜成纤维细胞共培养之前，口腔黏膜成纤维细胞采用丝裂霉素C进行处理。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(e)中口腔黏膜上皮细胞与口腔黏膜成纤维细胞共培养采用的培养基包含表皮生长因子、胰岛素、Rock抑制剂的DMEM/F12培养基。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述培养基是包含20纳克/毫升的重组人表皮生长因子、10微克/毫升重组人胰岛素、10微摩尔的Rock抑制剂Y-27632的DMEM/F12培养基。
9.如权利要求1所述的方法制备得到的上皮细胞片，所述细胞片为复层结构。
10.如权利要求9所述的上皮细胞片的用途，用于制备用于角膜移植的移植物。
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