[发明专利]一种灵芝烯酸B的制备方法

权利要求书

1.一种灵芝子实体提取物中灵芝烯酸B的制备方法：

(1)取灵芝子实体50kg切片，投入到中试提取设备中，加入8倍体积的87％无水乙醇提取2次，第一次2h，第二次1h；提取温度均为65℃；将这两次的提取液合并，在蒸煮罐中加热浓缩后再用20L旋转蒸发仪加热浓缩，获得灵芝子实体提取物；

将灵芝子实体提取物过D101大孔树脂洗脱，用60％乙醇洗脱，用3-5倍溶液体积洗脱，将洗脱组分浓缩，获得富含灵芝烯酸B的组分；

(2)在分液漏斗中配制正己烷:乙酸乙酯:甲醇:水5:5:2:9，V/V两相溶剂系统；

向高速逆流色谱仪中泵入上相，固定相，待管路充满上相后，以转速900r/min转动主机；

再以2ml/min流速泵入下相，流动相，检测波长为248nm；

待两相达到平衡即基线稳定后，用流动相配制浓度为20mg/mL的样品20ml，由进样阀进样，紫外检测器在线监测，检测波长为248nm；收集各个流分，用高效液相色谱法分析检测分离情况；并与灵芝烯酸B标准品作对比，收集合并含有灵芝烯酸B的馏分，并用高效液相面积归一法测得纯度为88.3％的灵芝烯酸B29.6mg；

灵芝烯酸B的高效液相色谱检测中，利用二极管阵列检测器进行色谱峰的全波段扫描，从而确定峰的纯度；

溶剂洗脱条件确定如下；

灵芝烯酸B的高效液相色谱法

色谱柱Agilent ZORBAX SB-Aq4.6mm×250mm，5μm，

流动相A为0.01％冰醋酸，B为乙腈梯度洗脱：

0min，A：72％；

25min，A：70％；

50min，A：61％；

60min，A：0％；

进样量10μL；柱温30℃；检测波长248nm；流速：1ml/min；

在该条件下，色谱图中呈现出两个色谱峰；

出峰时间为31min的色谱峰即目标化合物灵芝烯酸B，其相对峰面积为88.3％-89.1％；

出峰时间为37min的色谱峰为杂质峰，其相对峰面积为10.9％-11.7％；

灵芝烯酸B的高效液相图是说明书附图4。