[发明专利]一种灵芝烯酸B的制备方法有效
申请号: | 201710144614.0 | 申请日: | 2017-03-13 |
公开(公告)号: | CN106928305B | 公开(公告)日: | 2020-11-20 |
发明(设计)人: | 张劲松;冯娜;钱丁寅;冯杰;唐庆九;杨焱;刘艳芳;吴迪;颜梦秋;唐传红;刘方 | 申请(专利权)人: | 上海市农业科学院 |
主分类号: | C07J9/00 | 分类号: | C07J9/00 |
代理公司: | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人: | 汤东凤 |
地址: | 201403 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 灵芝 制备 方法 | ||
本发明公开了一种分离制备灵芝烯酸B的方法,包括以下几个步骤:(1)提取和富集灵芝烯酸B:将灵芝子实体加入75‑95%乙醇溶液加热提取,提取液浓缩;浓缩液经大孔树脂乙醇梯度洗脱吸附后,进行减压浓缩,(2)高速逆流色谱法分离纯化制备灵芝烯酸B:用高速逆流色谱进行灵芝烯酸B分离,然后用高效液相色谱法分析检测,收集、浓缩、干燥,分离得到灵芝烯酸B,本发明操作简单,污染小,成本低,灵芝烯酸B的得率、纯度高。
技术领域
本发明属于天然药物技术领域,具体涉及一种灵芝烯酸B的制备方法。
技术背景
灵芝烯酸B为三萜类化合物,CAS号100665-41-6,分子式C30H42O7,分子量514.65028,分子结构式如下:
灵芝三萜是灵芝的次级代谢产物,具有多种药理活性。文献报道,灵芝烯酸B在体外具有很强的抑制p388、BEL-7402、SGC-7901、HeLa等多种肿瘤细胞的活性,进一步的深入研究表明,灵芝烯酸B有调节ABCB1基因的作用,从而具有解决ABCB1基因介导的多药耐药问题的潜力。
通过文献检索,目前还没有发现灵芝烯酸B的制备方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种灵芝烯酸B的制备方法,该方法包括如下步骤:
(1)提取和富集灵芝烯酸B:将灵芝子实体加入乙醇溶液加热提取,提取液浓缩;浓缩液经大孔树脂乙醇梯度洗脱吸附后,进行减压浓缩。
(2)高速逆流色谱法分离纯化制备灵芝烯酸B:用高速逆流色谱进行灵芝烯酸B分离,然后用高效液相色谱法分析检测,收集、浓缩、干燥,分离得到灵芝烯酸B。
具体地说,本发明的一种灵芝烯酸B的制备方法,该方法包括如下步骤:
(1)提取和富集灵芝烯酸B:将灵芝子实体加入5-10倍75-95%乙醇溶液加热50-70℃提取,每次1-3小时,重复2-3次。将提取液加热减压浓缩,浓缩液经过D101大孔树脂用60%乙醇洗脱,用3-5倍溶液体积洗脱。将洗脱组分浓缩,获得富含灵芝烯酸B的组分。
(2)高速逆流色谱法分离灵芝烯酸B:溶剂体系由正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水组成,体积比为3-6:3-6:1-4:5-9,上为固定相,下为流动相;将富含灵芝烯酸B的组分用相溶液溶解并上样,高速逆流色谱流速范围1-3ml/min,转速范围700-900r/min,每4-10mL收集为一个馏分;然后用高效液相色谱法分析检测各试管收集液成分,紫外检测波长为248nm;按出峰情况收集、浓缩、干燥,分离得到灵芝烯酸B。
本发明考察了三种不同的大孔树脂(HZ-818,HZ-801和D-101),分别用60%乙醇洗脱,以洗脱物的得率和用高效液相考察灵芝烯酸B的含量为考量,最终选择D101大孔树脂。
依据大孔树脂、乙醇浓度的选择,请给出洗脱物的得率和用高效液相考察灵芝烯酸B的含量的具体数据。
本发明考察了正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水体系摸索,按照比例配好体系后充分震荡,分层后取上下相各2ml于试管中,加入含有灵芝烯酸B的组分样品少量,漩涡震荡,记录分层时间,待两相分层完毕后,吸取上下相各200ul于2ml离心管,放水浴锅上烘干溶剂后加1.5ml甲醇溶解,过膜后进行HPLC测定,记录目标物质的峰面积,根据分配系数计算公式算K值,K值应在0.5~2.0之间。
分配系数计算公式:K=AU/AL
式中:K为分配系数;AU为上相峰面积;AL为下相峰面积。
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