[发明专利]用于检测黄瓜果实表皮细胞结构的SNP标记方法

权利要求书

1.一种用于检测黄瓜果实表皮细胞结构的SNP标记的引物，其特征在于：其核苷酸序列如下：dcaps—RsaI—F:GGGAACAATATTATTTTTGGAGTA

dcaps—RsaI—R:TGATTCCTATTACCTTCAACCTCA

所述引物扩增的与黄瓜果实栅栏状表皮细胞基因Pe连锁的特征条带核苷酸序列如SeqID No.1所示，序列的第26位碱基为A，经RsaI酶切后得到158bp片段；

所述引物扩增的与黄瓜果实扁平状表皮细胞基因pe连锁的特征条带核苷酸序列如SeqID No.2所示，序列的第26位碱基为C，经RsaI酶切后得到134bp片段。

2.一种筛选具有果实栅栏状表皮细胞基因Pe的黄瓜种质资源的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)提取待测样品基因组DNA；

(2)以所述待测样品基因组DNA为模板，以权利要求1所述的引物进行PCR扩增；

(3)对PCR扩增片段进行测序或RsaI酶切；

如果测序结果如Seq ID No.1所示，果实表皮细胞结构为栅栏状，如果测序结果如SeqID No.2所示，果实表皮细胞结构为扁平状；

如果酶切后片段为158bp，则果实表皮细胞结构为栅栏状；如果酶切后片段为134bp，则果实表皮细胞结构为扁平状。

3.根据权利要求2所述的方法，所述PCR扩增的反应体系为:1.5ng/μl DNA模板，所述引物正向和反向各5ng/μl，0.5μl/μl GoGreen Master Mix，其余为双蒸水。

4.根据权利要求3所述的方法，所述PCR扩增的反应程序为：94℃预变性4分钟；94℃变性15秒，55℃退火15秒，72℃延伸30秒，35个循环；72℃保温5分钟，16℃保存。

5.根据权利要求2所述的方法，RsaI酶切的体系为：PCR产物3μl，内切酶0.2μl，NEBcutsmart buffer1μl，双蒸水5.8μl，酶切温度为37℃，酶切时间为2h。

6.一种用于筛选具有果实栅栏状表皮细胞基因Pe的黄瓜种质资源的试剂盒，其特征在于，包括粉状或溶液状态的核苷酸序列如下的引物：

dcaps—RsaI—F:GGGAACAATATTATTTTTGGAGTA

dcaps—RsaI—R:TGATTCCTATTACCTTCAACCTCA。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，包括RsaI酶。

8.权利要求6或7所述的试剂盒的制备方法，其特征在于，包括将权利要求1所述的引物包装为试剂盒的一部分的步骤。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，还包括组装PCR反应和/或电泳所需的试剂。