[发明专利]真核表达制备重组红鳍东方鲀白介素2蛋白的基因及方法在审
| 申请号： | 201710150095.9 | 申请日： | 2017-03-14 |
| 公开（公告）号： | CN106929514A | 公开（公告）日： | 2017-07-07 |
| 发明（设计）人： | 王秀利;孙鹤;李慧;孔德荣;刘海映;仇雪梅 | 申请（专利权）人： | 大连海洋大学 |
| 主分类号： | C12N15/26 | 分类号： | C12N15/26;C07K14/55;C12N15/81;C12R1/84 |
| 代理公司： | 大连非凡专利事务所21220 | 代理人： | 闪红霞 |
| 地址： | 116000 辽宁*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 表达 制备 重组 东方 白介素 蛋白 基因 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种真核表达制备重组红鳍东方鲀白介素2蛋白的基因，其特征在于所述基因的DNA序列如SEQ ID NO:1所示。
2.一种真核表达制备重组红鳍东方鲀白介素2蛋白的方法，其特征在于依次按照如下步骤进行：
a. 将DNA序列如SEQ ID NO:1所示的基因克隆入真核表达质粒pPICZαA上，得到真核表达重组质粒pPICZαA-IL-2；
b. 将得到的真核表达重组质粒pPICZαA-IL-2电转化入毕赤酵母GS115感受态中，筛选阳性克隆；
c. 将筛选出的阳性克隆接种到BMGY液体培养基内扩大培养至OD600nm=2~6，离心收集菌体；
d. 用无菌水重悬所收集的菌体，使OD600nm=1.0~2.0，离心后收集菌体； BMMY液体培养基重悬菌体后转接至100mL含BMMY液体培养基的锥形瓶中，使OD600nm=1.0~2.0；28~30℃、250~300 rpm震荡培养96h，期间每24h向培养基中添加甲醇至终浓度为1.5%；12000rpm，4℃离心3min收集上清，PBS缓冲液透析，3KD超滤管浓缩，75%硫酸铵沉淀法再次浓缩上清中的蛋白，收集沉淀，即得重组红鳍东方鲀白介素2蛋白。
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