[发明专利]一种天然组织来源的半月板脱细胞材料及其制备方法在审
| 申请号： | 201710150109.7 | 申请日： | 2017-03-14 |
| 公开（公告）号： | CN106943628A | 公开（公告）日： | 2017-07-14 |
| 发明（设计）人： | 林贤丰;陈蕴缤;陈家鑫 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | A61L27/36 | 分类号： | A61L27/36;A61K35/32;A61P19/08 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司33200 | 代理人： | 叶志坚 |
| 地址： | 310027 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 天然 组织 来源 半月板 细胞 材料 及其 制备 方法 | ||
1.一种天然组织来源的半月板脱细胞材料，其特征在于：将哺乳动物任意半月板组织经含蛋白酶抑制剂的生理盐水缓冲液、有机溶剂溶液、含Triton X的PBS缓冲液、含SDS的PBS缓冲液和含DNA酶的PBS缓冲液处理，获得脱细胞半月板材料；
所述的含蛋白酶抑制剂的生理盐水缓冲液质量浓度为1％-5％，蛋白酶抑制剂含量为10KIU/ml；
所述的有机溶剂溶液为三种溶液中的一种，三种溶液分别为等体积比的氯仿和甲醇溶液，质量浓度10％-100％的丙酮溶液，质量浓度30％-70％的乙醇溶液；
所述的含Triton X的PBS缓冲液的质量浓度1％-5％的Triton X-200或Triton X-100的PBS缓冲液；
所述的含SDS的PBS缓冲液的质量浓度0.5％-5％的SDS的PBS缓冲液，其中混合1-20mmol/L的Tris；
所述的含DNA酶的PBS缓冲液中DNA酶质量浓度为0.01-0.5mg/ml。
2.根据权利要求1所述的一种天然组织来源的半月板脱细胞材料的制备方法，其特征在于，该方法具体包括以下步骤：
(1)取哺乳动物全身任意半月板组织用无菌生理盐水漂洗3次、20分钟/次，去除血液、残余肌肉组织、毛发和韧带；
(2)接着在含蛋白酶抑制剂的生理盐水缓冲液中，恒温45℃摇床100rpm震荡8-24小时；
(3)在有机溶剂溶液中，恒温45℃摇床100rpm震荡脱脂2-12小时；
(4)在含Triton X的PBS缓冲液中，加入青霉素和链霉素混合抗菌液，恒温45℃摇床100rpm震荡4-15天；
(5)在含SDS的PBS缓冲液中，加入青霉素和链霉素混合抗菌液，恒温45℃摇床100rpm震荡2-8天；
(6)在含DNA酶的PBS缓冲液中，加入青霉素和链霉素混合抗菌液，37℃摇床100rpm震荡2-12小时；
(7)在无菌生理盐水中，37℃摇床100rpm震荡72小时，即得天然组织来源的半月板脱细胞材料；
混合抗菌液中青霉素和链霉素的浓度分别为10KIU/ml、10KIU/ml，青霉素和链霉素的比例为1:1；步骤(4)-(6)中PBS缓冲液和混合抗菌液体积比分别为10:1、10:1、5:1；
步骤(2)-(6)中，每个步骤完成后均用生理盐水冲洗5小时。
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