[发明专利]新型重组双功能融合蛋白及其制备方法和用途

说明书

本发明提供了一种新型重组双功能融合蛋白及其制备方法和用途；具体地，本发明提供的重组双功能融合蛋白(CD20mAb‑SD1)由抗人CD20单克隆抗体与人SIRPα膜外端第一个功能区(SIRPα‑Domain 1,SD1)串联而成。体外实验证实，该蛋白可同时与人CD20及人CD47结合，可通过抗体依赖、细胞介导的细胞毒及补体依赖的细胞毒活性而发挥对CD20阳性肿瘤细胞的治疗作用，同时可阻断CD47与SIRPα的结合，从而激活巨噬细胞对肿瘤细胞进行攻击，具有显著地抗肿瘤活性。

技术领域

本发明属于是生物医药领域，具体地本发明涉及新型重组双功能融合蛋白及其制备方法和用途。

背景技术

CD20是表达在B淋巴细胞膜表面的穿膜蛋白，生物学功能至今未明，有可能作为钙离子通道，促进B细胞免疫反应。CD20表达在除了早前细胞及浆细胞以外所有发育阶段的B细胞膜上。同时CD20也在B淋巴瘤、慢性B淋巴细胞白血病、毛细胞白血病、以及黑色素瘤干细胞上表达。已经批准上市的、针对CD20的单克隆抗体药物有利妥昔单抗(Rituximab)、阿托珠单抗(Obinutuzumab)、奥法木单抗(Ofatumumab)。这些抗体药物的作用机制均通过ADCC及CDC。然而在临床治疗过程中发现，有些患者经过一定时间治疗以后，可诱导CD20从细胞上脱落，从而失去对抗体药物的敏感性。有些患者则表达低亲和性基因型(158F)的Fcgamma受体(FcγRIIIA-158F)，对美罗华也具有一定的耐受性。所以如何克服患者对美罗华的耐受性，已成为抗体药物研发领域比较热门的话题。

CD47也是一种穿膜糖蛋白，属于免疫球蛋白超家族成员，在包括红细胞在内的几乎所有细胞表面表达。CD47的配体包括黏附因子(integrins)、凝血酶敏感蛋白1(thrombospondin-1)、以及信号调节蛋白(SIRPs)。CD47具有多种生物学功能，包括细胞迁移、T细胞、树突状细胞活化、轴突发育等。除此之外，CD47通过与SIRPα相互作用可抑制巨噬细胞的吞噬作用。CD47以这种方式传递一种所谓的“不要吃我”(Don't eat me)信号，可以保护血细胞等正常细胞不被巨噬细胞吞噬。

研究发现，除正常组织细胞表达CD47以外，许多肿瘤细胞过度表达CD47，并通过与巨噬细胞表面的SIRPα相结合而阻止巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬，这被视为肿瘤逃避机体免疫监视的一种机制。高表达CD47的肿瘤包括急性髓样白血病细胞(AML)、慢性髓样白血病细胞(CML)、急性淋巴细胞白血病细胞(ALL)、非何杰金氏淋巴瘤(NHL)、多发性骨髓瘤(MM)、膀胱癌、卵巢癌、前列腺癌、肺癌、大肠癌、乳腺癌、胰腺癌等等。

研究表明，用具有阻断CD47-SIRPα结合活性的CD47-特异性抗体给荷瘤小鼠注射，可以显著抑制肿瘤在小鼠体内的生长。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新型重组双功能融合蛋白及其制备方法和用途。

本发明的第一方面，提供了一种重组双功能融合蛋白，所述重组双功能融合蛋白包含：

第一结合结构域(D1)；和

第二结合结构域(D2)；

其中，所述第一结合结构域特异性结合靶分子CD20蛋白；

所述第二结合结构域特异性结合靶分子CD47蛋白。

在另一优选例中，所述D1为特异性结合CD20蛋白的抗体或抗体片段。

在另一优选例中，所述D2为特异性结合CD47蛋白的多肽片段，并且所述多肽片段衍生自SIRPα。

在另一优选例中，所述D1和所述D2通过连接肽相连；优选地，所述连接肽包括抗体恒定区序列。

在另一优选例中，D1为抗CD20单克隆抗体，D2为人SIRPα膜外端第一个功能区(SIRPα-Domain 1,SD1)，D2连接在D1的重链恒定区末端。