[发明专利]检测尿液病原菌的试剂盒及应用

权利要求书

1.检测尿液病原菌的试剂盒，其特征在于，包括尿液前处理试剂、病原菌ATP裂解液、中和液、ATP检测试剂；

所述尿液前处理试剂包括：体细胞消化液和ATP酶；

所述体细胞消化液包括体积分数0.5%Triton和质量分数为0.05%三氯乙酸，所述的ATP酶为100U /mL 三磷酸腺苷双磷酸酶；

所述病原菌ATP裂解液包括：质量分数为4%三氯乙酸；

所述中和液包括：123.4 mmol/L Tris-base、2.34mmol/L醋酸镁，pH为 8.2；

所述ATP检测试剂包括：16μg/mL荧光素酶、20μg/mL荧光素、20 mmol/L Tris-base、2mmol/L 醋酸镁，pH调至7.6；

所述尿液包括血尿、乳糜尿、蛋白尿、一般尿液。

2.一种非诊断目的的检测尿液中病原菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1) 取尿液900μL，加入100μL体细胞消化液和5μL的三磷酸腺苷双磷酸酶，所述体细胞消化液包括体积分数0.5%Triton和质量分数为0.05%三氯乙酸，所述三磷酸腺苷双磷酸酶为100U /mL 三磷酸腺苷双磷酸酶，混匀后放入30度水浴锅中消化10 min，然后2000g离心1min，弃沉淀后备用；

(2) 取步骤(1)得到的上清液500μL进行过柱，过柱所用滤膜为0.45μm孔径的滤膜，小柱置于2mL套管上，然后 6000g离心1 min，弃滤液，加入生理盐水500μL清洗1次，再6000g离心1 min，弃滤液，最后12000g 甩30s，将小柱换入一个新的套管中，备用；

(3) 在小柱中加入100μL病原菌ATP裂解液，所述ATP裂解液包括：质量分数为4%三氯乙酸；常温下裂解5 min，释放出病原菌中的ATP，后加入400μL中和液，所述中和液包括：123.4mmol/L Tris-base、2.34mmol/L醋酸镁，pH为 8.2；离心，收集滤液；

(4) 取出步骤（3）中滤液50μL于96孔微孔板中并放入orinII微孔板式发光检测仪中，把ATP检测试剂注入该仪器的进样器中，所述ATP检测试剂包括：16μg/mL荧光素酶、20μg/mL荧光素、20 mmol/L Tris-base、2 mmol/L 醋酸镁，pH调至7.6，通过进样器加入100μL荧光素酶反应液，加完后测量其发光值，检测时间为5s，记录其信号值。

3.权利要求1所述检测尿液病原菌的试剂盒在非诊断目的的检测尿液病原菌中的应用。