[发明专利]检测尿液病原菌的试剂盒及应用

说明书

本发明公开了检测尿液病原菌的试剂盒，包括尿液前处理试剂、病原菌ATP裂解液、中和液、ATP检测试剂，本发明建立一种快速检测尿液病原菌的技术体系，操作简便，检测快速、准确、灵敏，为临床尿路感染诊断提供一种可靠的方法，能降低临床无效用药，提高用药准确率。

技术领域

本发明属于医学检验技术领域，具体涉及检测尿液病原菌的试剂盒及应用。

背景技术

据世界组织统计，感染性疾病仍是发病率最高，引起人类死亡的主要原因。近30年来，由于大量广谱抗生素在临床的不合理应用，临床疾病相关微生物(包括细菌、病毒和某些寄生虫)的耐药性不断增加，引起正常菌群失调和大量耐药菌株出现。对于临床微生物感染，尤其是较为常见的病原菌感染来说，快速准确地判断有无病原菌感染，一方面有利于临床及时展开进一步检测与治疗，另一方面减少了不必要的医疗资源浪费，最终有助于合理使用抗菌药物，避免抗生素的滥用，延缓耐药的发生。

三磷酸腺苷(ATP)普遍存在于细菌等微生物细胞内，是微生物新陈代谢的能量物质。对于一定生理时期内的活体微生物，均有较恒定水平的三磷酸腺苷(ATP)持有量，使得三磷酸腺苷(ATP)浓度与活体微生物含量之间有较好的线性关系。当微生物死亡后，其体内的ATP很快被胞内酶所降解，不会对活体微生物的测定产生影响。因此，可以运用三磷酸腺苷(ATP)生物发光法来衡量尿液病原菌含量。

三磷酸腺苷(ATP)生物发光法是基于荧光发光原理，通过检测三磷酸腺苷(ATP)与荧光素-荧光素酶反应的荧光光子量强度来实现ATP的检测，其原理是在荧光素酶E(luciferase)和Mg²⁺的作用下，荧光素LH₂(luciferin)与ATP发生腺苷酰化被活化，活化后的荧光素与荧光素酶相结合，形成了荧光素-AMP复合体，并放出焦磷酸(PPi)。该复合体被分子氧氧化，形成激发态复合物P*-E·AMP，放出CO₂，当该复合物从激发态回到基态时发射光，并最终形成氧化虫荧光素P和AMP。

反应过程如下：

E+LH₂+ATP→E·LH₂-AMP+PPi (1)

E·LH₂-AMP+O₂→[P*-E-AMP]+CO₂ (2)

[P*-E-AMP]→E-P+AMP+hv (3)

在适当低的三磷酸腺苷(ATP)浓度范围内，其反应的速度与三磷酸腺苷(ATP)浓度成一级反应的关系，即检测的荧光值强度与ATP浓度成一定比例关系。正是由于被测样本所含细菌等微生物的数量与所含的ATP值、以及ATP值与发光值之间存在一定的函数关系，因此通过检测发光值即能得到被测标本所含细菌等微生物含量。ATP生物发光法的技术在临床尿液病原菌检测中没有相关试剂盒。

尿液病原菌检查是对尿路感染的检查，尿路感染是由病原菌(极少数可由真菌、原虫、病毒)直接侵袭所引起，因此尿液病原菌学检查对尿路感染的诊断与治疗有决定意义。目前临床上尿液病原菌的检测方法主要有细菌定量培养、显微镜检查、亚硝酸盐定性检测、全自动尿分析仪定量计数、DNA芯片技术等，细菌定量培养被认为是尿路感染的金标准，但是细菌培养技术要求高，多需2-4天才能获得结果，且培养阴性率高达70％-80％，检测费用也较高；显微镜检查可以缩短诊疗时间，但是人为分辨主观因素较大；亚硝酸盐定性检测可以初步判定是否存在菌尿，但是易受药物、食物的影响；全自动尿分析仪定量计数可对疑似尿路感染患者的尿液快速、无痛性筛查。但是该仪器价格偏高，基层医院难以接受,且无论活体菌还是已死亡菌都会统计在内；DNA芯片技术可以对尿液中的病原菌进行鉴定，鉴定结果可以直接用于做下一步的药敏，准确率高。但其成本比较高，技术要求高，通量检测程度低,基层医院一般难以接受。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种检测尿液病原菌的试剂盒。