[发明专利]一种检测链霉菌菌丝的增强拉曼基底及其制备和使用方法

说明书

本发明提供了一种检测链霉菌菌丝的增强拉曼基底及其制备和使用方法。该检测基底由下至上分别为滤膜层(1)、单分散纳米粒子层(2)、镀金属层(3)，该检测基底检测快速、灵敏度高，其制备过程如下：1)在滤膜层(1)上自组装得到单分散纳米粒子层(2)；2)在单分散纳米粒子层(2)上制备金纳米粒子层；3)以该金纳米粒子层中的金纳米粒子为核生长镀金属层(3)，得到所述的检测基底；该制备方法简单快捷。该检测基底可以用于检测样品中是否含有链霉菌菌丝，通过采集样品溶液的拉曼光谱，可以检测样品中是否有链霉菌菌丝以及菌丝的含量；该方法在临床检测、检验检疫、环境监测等领域具有广泛的应用前景。

技术领域

本发明涉及一种检测链霉菌菌丝的增强拉曼基底及其制备和使用方法，属于细菌检测领域。

背景技术

那西肽又名诺西肽、诺肽菌素或诺肽霉素，是含硫多肽类抗生素，由法国科学家于1961年在Streptomyces actllosl ZS 40037发酵液中首次发现，随后在阿根廷的土壤中获得一株合成那西肽的菌株，它对大多数革兰氏阳性菌，特别是金葡萄菌、链球菌和魏氏梭状芽孢杆菌敏感，通过阻碍细菌的蛋白质合成，阻抑了细菌生长，因此可防治呼吸道疾病和坏死性肠炎。目前，很多国家和地区(如欧盟、日本、中国台湾等地区)允许把那西肽作为饲料添加剂使用，1998年我国批准那西肽为国家三类新兽药，它具有明显的促进畜禽生长及改善饲料利用率的作用，在肠道内不易吸收，排除体外可迅速分解，而且用量低，残留量少，对环境影响小，属于安全性较高的环保型饲料添加剂。目前，合成那西肽的方法主要分为活跃链霉菌发酵法和化学合成法，两者相比，发酵法成本低廉，纯度低，那西肽成品中混有链霉菌菌丝，而化学合成法成本较高，纯度也高，成品中不含链霉菌菌丝。有厂家为了节约成本，用链霉菌发酵生产那西肽，以次充好，谎称是化学合成法合成的那西肽。因此，发明一种可用于检测链霉菌菌丝的方法来区分发酵法和化学合成法合成的那西肽刻不容缓。

目前，微生物的检测方法主要有培养染色观察法、免疫学方法、分子生物学方法和质谱法，传统的微生物培养法一般需要经过富集、分离培养、染色或者生化鉴定等步骤，整个检测过程繁琐、耗时长、工作量大，一般需要4～7天才能出检测结果，免疫学方法具有特异性好、敏感度高的优点，但由于微生物血清型复杂，检测中常出现假阳性结果，阳性结果需要其他试验进一步确认。近年来，基于聚合酶链式反应(PCR)技术的分子生物学技术由于特异性强、灵敏度高等优点发展非常迅速，但是某些微生物会产生腐殖酸，抑制PCR反应，造成假阳性的结果。质谱的方法进行微生物检测特异性强，灵敏度高，但是成本较高，不适合进行大批量样品的检测。

针对上述问题的解决方案是发明一种成本低廉、检测快速、简单可行的检测基底及检测方法，鉴于上述微生物检测技术研究进展，本发明提出一种那西肽预混剂中链霉菌菌丝的检测基底及其制备和使用方法。它不仅使试剂的消耗降低，且使实验速度提高，费用降低，充分体现了当今实验室设备微型化的发展趋势。

发明内容

技术问题:本发明的目的是提供一种链霉菌菌丝的增强拉曼检测基底，该基底成本低廉、样品需要量少、检测速度快、灵敏度高、检测简单。

本发明的另一个目的是提供一种链霉菌菌丝的检测基底的制备方法，该方法制备简单。

本发明的另一目的是提供一种链霉菌菌丝的增强拉曼检测的使用方法，用于链霉菌菌丝的快速检测，操作方便，成本低廉。

技术方案：本发明提供了一种检测链霉菌菌丝的增强拉曼基底，该基底由下至上分别为滤膜层、单分散纳米粒子层和镀金属层，且各层之间以自然堆叠方式进行连接。

其中：

所述的滤膜层的滤孔孔径为100～450nm，其材料是尼龙微孔滤膜、硝酸纤维素滤膜或普通滤纸；所述的镀金属层为镀银层、镀金层或者镀铜层。

所述的单分散纳米粒子层中纳米粒子的粒径为100～500nm，且比滤膜层的滤孔孔径大；所述的单分散纳米粒子层为单层或多层。