[发明专利]一种快速批量化测定水生动物基因组倍性的方法

说明书

技术领域

本发明属于倍性遗传育种及检测领域，更具体地说，涉及一种快速批量化测定水生动物基因组倍性的方法。

背景技术

育种是所有经济作物或动物可持续发展的重要基础。倍性育种是指利用生物学规律，在染色体组或者不同物种基因组层面上改良后代的遗传特征，得到人们想要的优良性状的育种方法。在人工条件下，阻断单倍体胚胎分裂的进程，将正常发育的单倍体胚胎诱导成正常二倍体(即雌核发育)或者阻断正常二倍体胚胎的有丝分裂，将正常发育的二倍体胚胎诱导成四倍体(即诱导四倍体)等过程就是在染色体组层面的遗传改良。远缘杂交是指利用亲缘关系在种以上的杂交育种方法，不同的物种基因组会出现不融合的现象，在远缘杂交子代中会出现多种倍性的个体。

由于多倍体个体及正常二倍体个体在外观上没有显著性的特征，无法从众多的个体中区分不同倍性个体。目前鉴定倍性的方法主要有：血细胞涂片、染色体制备及实验室流式细胞等方法。然而，现有的鉴定方法都需要对样品进行编号并带回实验室逐一鉴定，耗时较多，特别是针对大批量的水生动物后代时，无法进行批量检测。

有鉴于此，确有必要提供一种快速批量化测定水生动物基因组倍性的方法。

发明内容

本发明的目的在于：克服现有测定水生动物基因组倍性时存在的操作繁琐、耗时长等问题，提供一种快速批量化测定水生动物基因组倍性的方法。

为了实现上述发明目的，本发明通过取待测水生动物的父本或母本的体液或血液，以及参考物种的体液或血液，分别制成第一参考细胞悬液和第二参考细胞悬液，再取待测水生动物的体液或血液制成待测细胞悬液，通过单峰或双峰检测法，即可测定待测水生动物的基因组倍性。具体地，单峰检测法包括如下步骤：

(1)获取待测水生动物的父本或母本的体液或血液，制成第一参考细胞悬液；

(2)取步骤(1)所述第一参考细胞悬液，使用DAPI染色液染色，经荧光检测仪检测，记录第一参考细胞悬液的荧光值；

(3)抽取待测水生动物的体液或血液，制成待测细胞悬液；

(4)取步骤(3)所述待测细胞悬液，使用DAPI染色液染色，经荧光检测仪检测，记录待测细胞悬液的荧光值；

(5)将步骤(4)所述待测细胞悬液的荧光值与步骤(2)所述第一参考细胞悬液的荧光值进行比较，即可判断出待测水生动物的基因组倍性。

作为本发明快速批量化测定水生动物基因组倍性的方法的一种改进，所述荧光检测仪采用可激发DAPI染料的通道。

作为本发明快速批量化测定水生动物基因组倍性的方法的一种改进，所述荧光检测仪为流式细胞仪或倍性分析仪(型号：Partec Ploidy Analyser)。

双峰检测法包括如下步骤：

(1)获取待测水生动物的父本或母本的体液或血液，制成第一参考细胞悬液；

(2)取步骤(1)所述第一参考细胞悬液，使用DAPI染色液染色，经荧光检测仪检测，记录第一参考细胞悬液的荧光值；

(3)获取基因组大小已知的参考物种个体的体液或血液，制成第二参考细胞悬液；其中，基因组大小通过网址为http://www.genomesize.com/的动物基因组大小数据库中获取。

(4)取步骤(3)所述第二参考细胞悬液，使用DAPI染色液染色，经荧光检测仪检测，记录第二参考细胞悬液的荧光值；

(5)抽取待测水生动物的体液或血液，制成待测细胞悬液，将其与步骤(3)所述第二参考细胞悬液加入到装有DAPI染色液的容器中染色，经荧光检测仪检测，得到双峰直方图后记录荧光值；若无双峰直方图，则更换步骤(3)所述的参考物种；

(6)双峰直方图由参考物种的直方图和待测水生动物的直方图组成，根据两者的差距，结合步骤(2)所述第一参考细胞悬液的荧光值，即可判断出待测水生动物的基因组倍性。

作为本发明快速批量化测定水生动物基因组倍性的方法的一种改进，所述荧光检测仪采用可激发DAPI染料的通道。

作为本发明快速批量化测定水生动物基因组倍性的方法的一种改进，所述荧光检测仪为流式细胞仪或倍性分析仪(型号：PartecPloidy Analyser)。

本发明中，单峰法和双峰法均有各自的优势，其中，单峰法无需制备第二参考细胞悬液，无需挑选特定的参考物种基因组，只要有待测子代父母或母本个体即可进行子代群体基因组倍性检测，但检测结果无法得到待测水生动物的基因组大小、检测结果不够直观、需要粗略估算倍性，只适用于倍性快速检测和不同倍性个体鉴别。