[发明专利]一种调控小鼠骨实质来源间充质干细胞成脂分化的方法

权利要求书

1.miRNA和/或其抑制剂在调控小鼠骨实质来源的间充质干细胞成脂分化中的应用，所述miRNA为miR-146b-5p，其序列为5’-UGAGAACUGAAUUCCAUAGGCU-3’，所述调控为促进或抑制。

2.根据权利要求1所述的应用，所述miRNA抑制剂为单链RNA分子，其序列为5’-AGCCUAUGGAAUUCAGUUCUCA-3’。

3.一种促进小鼠骨实质来源间充质干细胞成脂分化的方法，其特征在于，包括以下步骤：

分离提取小鼠骨实质来源的间充质干细胞，然后进行原代培养、传代培养；

将miR-146b-5p导入传代培养后的小鼠骨实质来源间充质干细胞，然后培养。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述将miR-146b-5p导入传代培养后的小鼠骨实质来源间充质干细胞的方法为：用脂质体包裹miR-146b-5p mimic，接种于第三代指数期的小鼠骨实质来源间充质干细胞，当细胞融合40-60％时进行转染；所述miR-146b-5pmimic为双链RNA分子，其中有义链为5’-UGAGAACUGAAUUCCAUAGGCU-3’。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述脂质体为jetPRIME，其包裹miR-146b-5p mimic的方法为：将miR-146b-5p mimic用DEPC水稀释，得到终浓度为20μM的miR-146b-5p mimic水溶液；将水溶液按体积比1:40-50稀释于jetPRIME Buffer中，室温孵育3-8min，得到A液；将Jet Prime按体积比1:40-50稀释于Jet Prime Buffer，室温孵育3-8min，得到B液；混合A、B液，室温下静置20min，形成A/B复合物。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述转染方法为：将A/B复合物混合，控制miRNA终浓度为50nM，转染培养基为含10％FBS的α-MEM培养基，不含抗生素。

7.一种抑制小鼠骨实质来源间充质干细胞成脂分化的方法，其特征在于，包括以下步骤：

分离提取小鼠骨实质来源的间充质干细胞，然后进行原代培养、传代培养；

将miR-146b-5p抑制剂导入传代培养后的小鼠骨实质来源间充质干细胞，然后培养；所述miRNA抑制剂为单链RNA分子，其序列为5’-AGCCUAUGGAAUUCAGUUCUCA-3’。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述miR-146b-5p抑制剂导入传代培养后的小鼠骨实质来源间充质干细胞的方法为：用脂质体包裹miR-146b-5p抑制剂，接种于第三代指数期的小鼠骨实质来源间充质干细胞，当细胞融合40-60％时进行转染。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述脂质体为jetPRIME，其包裹miR-146b-5p抑制剂的方法为：将miR-146b-5p抑制剂用DEPC水稀释，得到终浓度为20μM的miR-146b-5p抑制剂水溶液；将水溶液按体积比1:40-50稀释于jetPRIME Buffer中，室温孵育3-8min，得到A液；将Jet Prime按体积比1:40-50稀释于Jet Prime Buffer，室温孵育3-8min，得到B液；混合A、B液，室温下静置20min，形成A/B复合物。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述转染方法为：将A/B复合物混合，控制miR-146b-5p抑制剂终浓度为50nM，转染培养基为含10％FBS的α-MEM培养基，不含抗生素。