[发明专利]一种调控小鼠骨实质来源间充质干细胞成脂分化的方法

说明书

本发明公开了一种调控小鼠骨实质来源间充质干细胞成脂分化的方法。此方法将miRNA和/或其抑制剂应用于调控小鼠骨实质来源间充质干细胞成脂分化中，所述miRNA为miR‑146b‑5p，其序列为5’‑UGAGAACUGAAUUCCAUAGGCU‑3’，所述调控为促进或抑制。本发明利用miR‑146b‑5p或其抑制剂对小鼠骨实质来源MSC成脂分化能力的调控作用，过表达miR‑146b‑5p后，MSC成脂分化能力显著升高；敲减miR‑146b‑5p后，MSC成脂分化能力显著下降，由此提出了调控间充质干细胞成脂分化的新型小分子化合物，可应用于调节脂肪合成、控制间充质干细胞成脂分化。

技术领域

本发明属于间充质干细胞培养技术领域，具体涉及一种调控小鼠骨实质来源间充质干细胞成脂分化的方法。

背景技术

间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSC)是一类具有多向分化潜能的成体干细胞，广泛存在于动物组织和器官，例如骨髓、脂肪组织、心脏、肺脏及新生儿组织包括胎盘、羊膜和脐带，在适宜条件下能够分化为成骨细胞、脂肪细胞、心肌细胞等多种类型细胞。MSC还可以通过分泌细胞外基质和可溶性因子，如细胞因子、趋化因子、生长因子等多种代谢产物，间接调控肿瘤发生与发展。

微小RNA(microRNA，miRNA)是生物体内一类具有调控基因表达作用的非编码小RNA分子，其发夹状前体经Dicer酶切成为21-24nt的成熟的miRNA，通过与靶基因mRNA碱基互补配对的方式，下调基因表达或促进下游mRNA降解。在生物体发育、细胞程序性凋亡坏死、细胞增殖、免疫和神经系统模式形成等生命过程中，miRNA的表达与调控发挥着至关重要的作用，其表达异常可以导致多种疾病发生。因此，深入研究miRNA的功能将有助于我们理解生物发育与疾病的作用机制。同理，也有大量的miRNA参与MSC的增殖、分化、迁移以及免疫调控等生物学功能。

发明内容

本发明人通过研究，发现miR-146b-5p对小鼠骨实质来源MSC成脂分化能力的调控作用。

本发明目的之一在于提供miRNA和/或其抑制剂在调控小鼠骨实质来源的间充质干细胞成脂分化中的应用，所述miRNA为miR-146b-5p，其序列为5’-UGAGAACUGAAUUCCAUAGGCU-3’，所述调控为促进或抑制。

上述应用中，所述miRNA抑制剂为单链RNA分子，其序列为5’-AGCCUAUGGAAUUCAGUUCUCA-3’。

本发明同时也提供了一种促进小鼠骨实质来源间充质干细胞成脂分化的方法，包括以下步骤：

分离提取小鼠骨实质来源的间充质干细胞，然后进行原代培养、传代培养；

将miR-146b-5p导入传代培养后的小鼠骨实质来源间充质干细胞，然后培养。

上述方法中，所述将miR-146b-5p导入传代培养后的小鼠骨实质来源间充质干细胞的方法为：用脂质体包裹miR-146b-5p mimic，接种于第三代指数期的小鼠骨实质来源间充质干细胞，当细胞融合40-60％时进行转染；所述miR-146b-5p mimic为双链RNA分子，其中有义链为5’-UGAGAACUGAAUUCCAUAGGCU-3’。

上述方法中，所述脂质体为jetPRIME，其包裹miR-146b-5p mimic的方法为：将miR-146b-5p mimic用DEPC水稀释，得到终浓度为20μM的miR-146b-5p mimic水溶液；将水溶液按体积比1:40-50稀释于jetPRIME Buffer中，室温孵育3-8min，得到A液；将Jet Prime按体积比1:40-50稀释于Jet Prime Buffer，室温孵育3-8min，得到B液；混合A、B液，室温下静置20min，形成A/B复合物。