[发明专利]用于构建测序文库的接头核酸分子

权利要求书

1.一种用于构建测序文库的接头核酸分子，其特征在于，包括：

第一核酸链，所述第一核酸链包含PCR反应断点，所述PCR反应断点包括选自下列的至少之一：

(1)核酸消化酶特异性识别位点；以及

(2)DNA聚合酶不识别位点；

所述接头核酸分子进一步包含：

第二核酸链，所述第一核酸链与所述第二核酸链的至少一部分形成双链区，并且所述双链区的一端构成所述接头核酸分子的连接反应末端；

所述的第二核酸链进一步包含位于5’端的PCR反应断点，第二核酸链包含的PCR反应断点包括选自下列的至少之一：

(1)核酸消化酶特异性识别位点；以及

(2)DNA聚合酶不识别位点；

所述第一核酸链包含的核酸消化酶特异性识别位点位于PCR引物互补区域毗邻的第一核酸链的3’区域；

所述第一核酸链包含的DNA聚合酶不识别位点位于PCR引物互补区域或者PCR引物互补区域毗邻的第一核酸链的3’区域；

所述的核酸消化酶选自UNG酶或USER酶；

所述PCR反应断点为UU。

2.根据权利要求1所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸消化酶为USER酶。

3.根据权利要求1所述的核酸分子，其特征在于，DNA聚合酶为Pfu DNA 聚合酶或deepventDNA 聚合酶。

4.根据权利要求1所述的核酸分子，其特征在于，所述第一核酸链为SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列；

所述第二核酸链为SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。

5.一种构建测序文库的方法，其特征在于，包括：

将待测序的DNA片段与接头连接，以便获得连接产物，所述接头为权利要求1~4中任一项所述的核酸分子；以及

对所述连接产物进行扩增处理，以便获得扩增产物，

其中，所述扩增处理中，基于所述PCR反应断点，去除接头自连或互连产物。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述PCR反应断点包括核酸消化酶特异性识别位点，所述扩增处理进一步包括：

（1）利用所述核酸消化酶对所述连接产物进行消化处理，以便获得消化产物；

（2）从所述消化产物中去除长度不大于预定阈值的核酸片段；以及

（3）利用DNA聚合酶对经过步骤（2）处理的所述消化产物进行PCR扩增反应，以便获得所述扩增产物，

所述核酸消化酶为USER酶和/或UNG酶，

所述从所述消化产物中去除长度不大于预定阈值的核酸片段是利用XP磁珠纯化实现的。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述PCR反应断点包括DNA聚合酶不识别位点，所述PCR反应进一步包括：

(a)利用DNA聚合酶对所述连接产物进行PCR扩增反应，以便获得PCR扩增粗产物；

(b)从所述PCR扩增粗产物中去除长度不大于预定阈值的片段，以便获得所述扩增产物，

所述从所述PCR扩增粗产物中去除长度不大于预定阈值的片段是利用XP磁珠纯化实现的。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述待测序的DNA片段是通过如下方式获得的：

1）将待测样品的RNA进行分离、纯化和打断处理；

2）对经过步骤1）处理的RNA进行反转录，以便获得cDNA，所述cDNA为所述待测序的DNA片段，

所述反转录是通过如下方式进行的：

（A）以经过步骤1）处理的RNA为模板，反转录合成DNA第一链，以便获得RNA/DNA杂交链；

（B）利用RNaseH对RNA/DNA杂交链中的RNA链进行消化处理；

（C）以步骤（B）消化处理后的残余RNA链为引物，以所述DNA第一链为模板，反转录合成DNA第二链；

（D）利用RNaseH对步骤（C）产物进行消化处理；以及

（E）将步骤（D）处理产物进行末端补齐处理，以便获得所述cDNA。