[发明专利]一种人血浆中他达拉非的定量分析方法

权利要求书

1.一种人血浆中他达拉非的定量分析方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）标准工作溶液的配制：称取他达拉非，加入体积比9:1的甲醇-二甲亚砜溶液配制成浓度为0.100～5.000 mg•mL^-1的他达拉非储备液，将所述他达拉非储备液用体积比1:1的甲醇水溶液稀释成梯度浓度为40.0～40000 ng•mL^-1的他达拉非工作溶液；按上述步骤重复一次，配置成梯度浓度为40.0~320000 ng•mL^-1的他达拉非平行工作溶液；称取他达拉非-d3，加入体积比9:1的甲醇-二甲亚砜溶液配制成浓度为0.050～2.000 mg•mL^-1的内标储备液，用体积比1:1的甲醇水溶液稀释成300～500 ng•mL^-1的内标工作溶液；所有储备液及工作溶液在0~10℃下保存，备用；

取空白人正常血浆，分别加入所述他达拉非工作溶液，混匀，配置成相应梯度的校正标样，其浓度范围为2.00~2000 ng•mL^-1；取空白人正常血浆，分别加入所述他达拉非平行工作溶液，混匀，配置成相应梯度的质控样品，其梯度浓度范围为2.00~16000 ng•mL^-1；

（2）样品处理：取等体积的校正标样、质控样品、试验样品、空白人血浆和水，往校正标样、质控样品、试验样品中分别加入等体积的所述内标工作溶液，往空白人血浆和水分别加入等体积的甲醇水溶液；向上述每个混合液中加入乙腈，混匀，离心，转移上清液至甲醇水溶液中，混匀，将各提取物保存；

（3）标准曲线制作：将步骤（2）得到校正标样、质控样品的提取物进行LC-MS/MS分析测定，以他达拉非和内标他达拉非的色谱峰面积比为纵坐标，以人血浆中他达拉非的浓度为横坐标制作标准曲线；

（4）定量分析：将试验样品按照步骤（3）的方法处理，并按步骤（3）所得的标准曲线方程计算，得到试验样品中他达拉非的浓度。

2.根据权利要求1所述的一种人血浆中他达拉非的定量分析方法，其特征在于，步骤（3）中所述LC-MS/MS分析测定过程的工作条件为：

a.色谱条件：色谱柱为UItimateXB C18；流动相A：含0.1%甲酸和10mM甲酸铵的水溶液；流动相B：乙腈；柱温箱温度：30℃；流速：1.0 mL/min；色谱柱平衡状态时的柱压：11.5～12.5 MPa；洗脱方式为梯度洗脱；

b.质谱条件：离子源为ESI源，采用正离子模式、多反应监测模式；电喷雾电压：4500V；涡旋离子喷雾温度：650℃；气帘气种类：30psi；碰撞池气体：中级；雾化气种类Gas1：50psi；辅助气Gas 2：60 psi；数据收集时间：3min。

3.根据权利要求1所述的一种人血浆中他达拉非的定量分析方法，其特征在于：步骤（1）中所述他达拉非储备液的浓度为1.00 mg•mL^-1，所述内标储备液的浓度为0.500 mg•mL^-1，所述他达拉非工作溶液的梯度浓度分别为40.0、80.0、400、1600、4000、20000、36000、40000 ng•mL^-1，所述他达拉非平行工作溶液的浓度梯度为40.0、120、1800、30000、320000ng•mL^-1，所述内标工作溶液的浓度为400 ng•mL^-1。

4.根据权利要求1所述的一种人血浆中他达拉非的定量分析方法，其特征在于，步骤（1）所述质控样品的梯度浓度分别为2.00、6.00、90.0、1500、16000 ng•mL^-1，所述质控样品于-15~ -90 ℃储存；所述校正标样的梯度浓度分别为2.00、4.00、20.0、80.0、200、1000、1800、2000 ng•mL^-1，所述校正标样为新鲜配制。

5.根据权利要求1所述的一种人血浆中他达拉非的定量分析方法，其特征在于，步骤（2）所述离心的条件为以1700×g的速度离心15min。