[发明专利]辛伐他汀和辛伐他汀羟基酸浓度的定量分析方法

权利要求书

1.一种辛伐他汀和辛伐他汀羟基酸浓度的定量分析方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）标准工作溶液的配制：取pH4.50、0.0100 mol/L醋酸-醋酸钠缓冲液；将乙腈与所述醋酸-醋酸钠缓冲液等体积混合配制成乙腈-醋酸溶液；

称取辛伐他汀，加入乙腈，配制成浓度为0.200～0.300 mg•mL^-1的辛伐他汀储备液，按上述步骤重复一次，获得辛伐他汀平行储备液；称取辛伐他汀羟基酸钠盐，加入体积比为1:1的乙腈-二甲基亚砜溶液，配置成浓度为0.200～0.300 mg•mL^-1的辛伐他汀羟基酸储备液，按上述步骤重复一次，获得辛伐他汀羟基酸平行储备液；

取等体积的辛伐他汀储备液和辛伐他汀羟基酸储备液混合，再用所述乙腈-醋酸溶液稀释成梯度浓度为2.00～2000 ng•mL^-1的辛伐他汀/辛伐他汀羟基酸工作溶液；取等体积的辛伐他汀平行储备液和辛伐他汀羟基酸平行储备液混合，再用所述乙腈-醋酸溶液稀释成梯度浓度为2.00～16000 ng•mL^-1的辛伐他汀/辛伐他汀羟基酸平行工作溶液；

取辛伐他汀平行储备液用乙腈-醋酸溶液稀释成梯度浓度为12.0～2000 ng•mL^-1的辛伐他汀工作溶液；取辛伐他汀羟基酸平行储备液用乙腈-醋酸溶液稀释成梯度浓度为12.0～2000 ng•mL^-1的辛伐他汀羟基酸工作溶液；

称取辛伐他汀-d₆，加入乙腈，配制成浓度为0.050~0.150mg•mL^-1的辛伐他汀-d6内标储备液；称取辛伐他汀羟基酸-d₆，加入体积比为1:1的乙腈-二甲基亚砜溶液，配置成浓度为0.050～0.150 mg•mL^-1的辛伐他汀羟基酸-d6内标储备液；将所述辛伐他汀-d6内标储备液与辛伐他汀羟基酸-d6内标储备液等体积混匀，再加入所述乙腈-醋酸溶液，获得内标工作溶液；

取空白人正常血浆，分别加入所述辛伐他汀/辛伐他汀羟基酸工作溶液、醋酸-醋酸钠缓冲液，混匀，配置成相应梯度的校正标样，其梯度浓度范围为0.100~100 ng•mL^-1；

取空白人正常血浆，加入所述辛伐他汀/辛伐他汀羟基酸平行工作溶液、醋酸-醋酸钠缓冲液，混匀，配置成相应梯度的质控样品，其梯度浓度范围为0.100~800 ng•mL^-1；

所有储备液及工作溶液在0~10℃下保存，备用；

（2）样品处理：

空白试剂：将等体积的所述醋酸-醋酸钠缓冲液与水混合；

空白基质：将不少于3个供体的空腹采血混匀，加入等体积的醋酸-醋酸钠缓冲液，配制成混合空白人正常血浆，将不少于3个供体的餐后采血混匀，加入等体积的醋酸-醋酸钠缓冲液，配制成混合空白人高脂血浆；将上述混合空白人正常血浆和混合空白人高脂血浆等体积混匀；

取等体积的校正标样、质控样品、试验样品、空白基质和空白试剂，往校正标样、质控样品、试验样品中分别加入所述内标工作溶液，往空白基质和空白试剂中分别加入所述乙腈-醋酸溶液；向上述每个混合液中加入所述醋酸-醋酸钠缓冲液、甲基叔丁基醚，混匀，离心，转移上清液，氮吹，将各提取物保存；

（3）标准曲线制作：将步骤（2）得到校正标样、质控样品的提取物进行LC-MS/MS分析测定，以辛伐他汀比内标辛伐他汀-d6、辛伐他汀羟基酸比内标辛伐他汀羟基酸-d6的色谱峰面积比为纵坐标，以人血浆中辛伐他汀、辛伐他汀羟基酸的浓度为横坐标制作标准曲线；

（4）定量分析：取试验样品按照步骤（3）的方法处理，并按步骤（3）所得的标准曲线方程计算，得到待测样品中辛伐他汀、辛伐他汀羟基酸的浓度。