[发明专利]辛伐他汀和辛伐他汀羟基酸浓度的定量分析方法

说明书

本发明公开了一种辛伐他汀和辛伐他汀羟基酸浓度的定量分析方法，包括如下步骤：（1）标准工作溶液的配制；（2）样品处理；（3）标准曲线制作；（4）定量分析：将试验样品按照步骤（3）的方法处理，并按步骤（3）所得的标准曲线方程计算，得到试验样品中辛伐他汀和辛伐他汀羟基酸的浓度。本发明应用液质联用技术(HPLC‑MS/MS)同时测定人血浆中辛伐他汀和辛伐他汀羟基酸的浓度，在血浆样品中加入适量的酸碱来消除辛伐他汀和辛伐他汀羟基酸基质效应的干扰，并通过色谱柱、溶解液、流动相、质谱条件等的合理选择，流速、洗脱方式，减少了残留，增强了选择性，提高了灵敏度，重复性高，准确性好，可操作性强，可以直接运用于生物等效性中样品检测分析。

技术领域

本发明属于生物分析领域，更具体地，涉及一种应用液质联用技术(HPLC-MS/MS)测定人血浆中辛伐他汀和辛伐他汀羟基酸的定量分析方法。

背景技术

辛伐他汀，是他汀类的降血脂药物，可抑制内源性胆固醇的合成，用于控制血液中胆固醇的含量以及预防心血管疾病。辛伐他汀是土曲霉发酵产物的合成衍生物，口服后对肝脏有高度的选择性，其在肝脏中的浓度明显高于其他非靶性组织，辛伐他汀的大部分经肝组织吸收，主要作用在肝脏发挥，能明显改善肝脏对脂肪的代谢功能，随后从胆汁中排泄，口服剂量的95％可与血浆蛋白结合。

根据临床观察，患有高胆固醇血症的老年人连续小剂量服用辛伐他汀5～10mg后，血脂改善总有效率TC为87％，TG及HDLC为53％，LDL-C为93％；说明对于老年高胆固醇血症患者，小剂量辛伐他汀降脂效果也很好，可节省大量医疗费用。

由于辛伐他汀和辛伐他汀羟基酸是两个需要同时在线检测的物质，且他们存在一定的基质效应，因此，亟需提供一种能够消除干扰、减少残留、增加灵敏度的辛伐他汀和辛伐他汀羟基酸的定量分析检测方法。

发明内容

本发明针对上述现有技术中的不足，提供了一种人血浆中辛伐他汀和辛伐他汀羟基酸的定量分析方法，使辛伐他汀和辛伐他汀羟基酸同时在线检测成为了可能。

本发明的上述目的是通过以下技术方案予以实现的。

一种辛伐他汀和辛伐他汀羟基酸浓度的定量分析方法，包括如下步骤：

(1)标准工作溶液的配制：取pH4.50、0.0100mol/L醋酸-醋酸钠缓冲液；将乙腈与所述醋酸-醋酸钠缓冲液等体积混合配制成乙腈-醋酸溶液；

称取辛伐他汀，加入乙腈，配制成浓度为0.200～0.300mg·mL^-1的辛伐他汀储备液，按上述步骤重复一次，获得辛伐他汀平行储备液；称取辛伐他汀羟基酸钠盐，加入体积比为1:1的乙腈-二甲基亚砜溶液，配置成浓度为0.200～0.300mg·mL^-1的辛伐他汀羟基酸储备液，按上述步骤重复一次，获得辛伐他汀羟基酸平行储备液；

取等体积的辛伐他汀储备液和辛伐他汀羟基酸储备液混合，再用所述乙腈-醋酸溶液稀释成梯度浓度为2.00～2000ng·mL^-1的辛伐他汀/辛伐他汀羟基酸工作溶液；取等体积的辛伐他汀平行储备液和辛伐他汀羟基酸平行储备液混合，再用所述乙腈-醋酸溶液稀释成梯度浓度为2.00～16000ng·mL^-1的辛伐他汀/辛伐他汀羟基酸平行工作溶液；

取辛伐他汀平行储备液用乙腈-醋酸溶液稀释成梯度浓度为12.0～2000ng·mL^-1的辛伐他汀工作溶液；取辛伐他汀羟基酸平行储备液用乙腈-醋酸溶液稀释成梯度浓度为12.0～2000ng·mL^-1的辛伐他汀羟基酸工作溶液；