[发明专利]一种用于高效快速扩增cDNA末端的锚定引物及扩增方法

权利要求书

1.一种用于高效快速扩增cDNA 5’末端的锚定引物，其特征在于，所述5’末端锚定引物的序列末端含3个鸟嘌呤，其中前两个鸟嘌呤为单脱氧鸟嘌呤，最末端的一个鸟嘌呤为锁核酸修饰鸟嘌呤；所述5’末端锚定引物的序列自身形成3’末端部分突出的茎环状结构；所述5’末端锚定引物的序列为ATGCAGACGATTCTACGCTGTGTTCTArGrG+G。

2.如权利要求1所述的用于高效快速扩增cDNA 5’末端的锚定引物，其特征在于，所述5’末端锚定引物的序列与所有物种转录本不存在特异性结合区。

3.如权利要求1所述的用于高效快速扩增cDNA 5’末端的锚定引物，其特征在于，所述5’末端锚定引物的序列末端与cDNA 5’末端的胞嘧啶碱基互补配对，待M-MLV反转录酶合成cDNA至末端时，以所述5’末端锚定引物作为模板进行延伸。

4.一种高效快速扩增cDNA末端的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有权利要求1～3任一项所述的用于高效快速扩增cDNA 5’末端的锚定引物以及用于高效快速扩增cDNA 3’末端的锚定引物。

5.如权利要求4所述的一种高效快速扩增cDNA末端的试剂盒，其特征在于，所述用于高效快速扩增cDNA 3’末端的锚定引物序列末端连接30个dT，并且所述3’末端锚定引物序列自身不形成发夹结构；且锚定引物序列与所有物种转录本不存在特异性结合区。

6.如权利要求5所述的一种高效快速扩增cDNA末端的试剂盒，其特征在于，所述用于高效快速扩增cDNA 3’末端的锚定引物序列为CGATCTGGGCTCTGTGTTCTC-(dT)30。

7.一种采用如权利要求4-6任一所述的试剂盒高效快速扩增cDNA的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)、采用所述用于高效快速扩增cDNA 5’末端的锚定引物扩增目的基因的5'末端的cDNA片段，得到5'末端的RACE产物；(2)、采用用于高效快速扩增cDNA3’末端的锚定引物扩增目的基因的3'末端的cDNA片段，得到3'末端的RACE产物；(3)、从步骤(1)和步骤(2)中获得的2个有相互重叠序列的3'及5'末端的RACE产物中获得全长cDNA，或通过分析RACE产物的3'和5'端序列，合成相应引物扩增出全长cDNA。

8.如权利要求7所述的一种高效快速扩增cDNA的方法，其特征在于，所述步骤(1)中得到5'末端的RACE产物的方法为：以用于高效快速扩增cDNA 5’末端的锚定引物作为上游引物，目的基因特异引物R-Primer作为下游引物，以合成的第一链cDNA为模板，进行PCR循环，把目的基因5'末端的cDNA片段扩增出来，得到5'末端的RACE产物；所述步骤(2)中得到3'末端的RACE产物的方法为：以目的基因特异引物F-Primer作为上游引物，用于高效快速扩增cDNA 3’末端的锚定引物作为下游引物，以合成的第一链cDNA为模板，进行PCR循环，把目的基因3'末端的cDNA片段扩增出来，得到3'末端的RACE产物。