[发明专利]甜瓜种子纯度检测的特异性序列及检测方法和应用

权利要求书

1.一种夏蜜甜瓜种子纯度检测的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)提取被测样本的基因组DNA；

(2)利用特异性引物序列对样本线粒体基因组DNA进行PCR扩增和检测；

(3)对检测结果进行SSR多态性标记和特征条带统计；

(4)计算甜瓜种子纯度；

步骤(2)中所述特异性引物序列选自以下序列组中一组或两组以上：

SEQ ID NO.07和SEQ ID NO.08；SEQ ID NO.09和SEQ ID NO.10；SEQ ID NO.11和SEQID NO.12；SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14；SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16；SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.18；SEQ ID NO.19和SEQ ID NO.20；SEQ ID NO.27和SEQ ID NO.28；SEQ IDNO.29和SEQ ID NO.30；SEQ ID NO.31和SEQ ID NO.32；SEQ ID NO.39和SEQ ID NO.40；SEQID NO.41和SEQ ID NO.42；SEQ ID NO.43和SEQ ID NO.44；SEQ ID NO.51和SEQ ID NO.52；SEQ ID NO.53和SEQ ID NO.54；SEQ ID NO.59和SEQ ID NO.60；SEQ ID NO.67和SEQ IDNO.68；SEQ ID NO.69和SEQ ID NO.70。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述被测样本包括亲本材料和群体材料。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述PCR扩增为Touch-DownPCR。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，Touch-Down PCR扩增程序为：94-95℃预变性2-5min；然后94-95℃变性20-30s，65-70℃退火50s-2min，72℃延伸30-60s，共5-8个循环，每个循环退火温度降低2℃；然后94-95℃变性20s，55-60℃退火1min，72℃延伸30-60s，共7-10个循环，每个循环退火温度降低1℃；然后94-95℃变性20-30s，50-55℃退火30s，72℃延伸30s，共13-18个循环；最后72℃延伸5min保存。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行检测。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤(2)中采用8％的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行检测。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)中根据甜瓜群体材料的特征条带结果，分别统计与父本材料和母本材料条带一致的个体数量，计算种子纯度。

8.特异性引物序列在夏蜜甜瓜种子纯度检测领域中的应用，所述特异性引物序列选自以下序列组中一组或两组以上：

SEQ ID NO.07和SEQ ID NO.08；SEQ ID NO.09和SEQ ID NO.10；SEQ ID NO.11和SEQID NO.12；SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14；SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16；SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.18；SEQ ID NO.19和SEQ ID NO.20；SEQ ID NO.27和SEQ ID NO.28；SEQ IDNO.29和SEQ ID NO.30；SEQ ID NO.31和SEQ ID NO.32；SEQ ID NO.39和SEQ ID NO.40；SEQID NO.41和SEQ ID NO.42；SEQ ID NO.43和SEQ ID NO.44；SEQ ID NO.51和SEQ ID NO.52；SEQ ID NO.53和SEQ ID NO.54；SEQ ID NO.59和SEQ ID NO.60；SEQ ID NO.67和SEQ IDNO.68；SEQ ID NO.69和SEQ ID NO.70。