[发明专利]甜瓜种子纯度检测的特异性序列及检测方法和应用

说明书

本发明提供了一种快速、准确检测甜瓜种子纯度的特异性序列和方法。所述特异性序列，选自以下序列组中的一组或两组以上：SEQ ID NO.01和SEQ ID NO.02；SEQ ID NO.03和SEQ ID NO.04；一直到SEQ ID NO.79和SEQ ID NO.80。本发明还提供了一种甜瓜种子纯度检测的方法，包括如下步骤：(1)提取样本基因组DNA；(2)利用引物序列对样本线粒体基因组DNA进行PCR扩增和检测；(3)进行SSR多态性标记和特征条带统计；(4)计算甜瓜种子纯度。本发明首次基于甜瓜线粒体基因组父系遗传特性，开发了一套多态性较高的甜瓜线粒体基因组SSR标记，用于甜瓜种子纯度的快速检测和鉴定。

技术领域

本发明属于农业的蔬菜品种鉴定与良种领域，公开了一种快速、准确检测甜瓜种子纯度的方法。

背景技术

甜瓜果肉鲜美多汁，风味甜美，是我国重要作物，在我国经济作物生产中具有十分重要地位，且其种子单价高、销售利润可观。在甜瓜品种制种过程中，由于人工去雄不彻底，导致自交种混杂，是种子纯度降低最主要的因素，给生产和经营带来的商业隐患。此外，人为造假、掺假等假冒伪劣种子也导致了大量侵害农业生产的事故。

为了确保甜瓜生产安全，常规的种子纯度鉴定方法是田间形态学鉴定以及基于核基因组的分子标记鉴定。虽然田间形态学鉴定结果可靠，实施简单，但需要占据大量宝贵的温室空间，且检测周期长，耗时费工，难以满足实际生产需求；而随着基因技术的快速房展，基于核基因组的分子标记鉴定技术已经在一些蔬菜作物品种种子纯度检验中得到应用。

申请号为201310305714.9，公布号为CN103627786A的中国发明专利申请公开了一种甜瓜种子纯度检验的方法，是利用SSR分子标记对金露三号甜瓜种子进行纯度检验的方法。其利用一对SSR引物FLWSSRL和FLWSSRR对甜瓜杂交品种金露三号的父母本和杂交一代的基因组DNA进行扩增和琼脂糖凝胶电泳分离，找出杂交一代与父母本差异的特征谱带，通过受检种子纯度计算，对金露三号杂一代种子样品进行检验。申请号为201410332784.8，公布号为CN104059992A的发明专利申请公开了一种基于EST-SSR标记的甜瓜品种绿天使杂交种种子纯度鉴定的方法。该方法以甜瓜品种绿天使杂交种及其双亲的基因组DNA为模板，通过GeneBank数据库上公布的214条甜瓜EST序列，利用Primer3.0在线引物设计，设计了57对EST-SSR引物。经过筛选，得到1对杂交种带型为双亲的互补带型引物，经田间验证试验引物稳定性良好，且与田间试验结果较为吻合，能够对甜瓜杂交品种进行纯度鉴定。但是核基因组的鉴定技术，由于亲本材料遗传背景不确定，需要大规模筛选核基因组特异标记，限制了品种纯度检测的效率。

发明内容

本发明所解决的现有技术的问题是：虽然基于核基因组DNA的鉴定技术在解决了常规田间形态学鉴定费时费力，但是现有的基于甜瓜种子的纯度的鉴定方法集中在对于甜瓜核基因组DNA的鉴定，而针对核基因组DNA的鉴定技术，由于亲本材料遗传背景不确认，需要大规模筛选核基因组特异标记，从而限制了甜瓜品种纯度检测的效率。

本发明基于前期发现，即甜瓜线粒体基因组表现出的独特的父系遗传特性，设计了基于甜瓜线粒体基因组的引物序列，用来检测甜瓜品种纯度。甜瓜线粒体基因组表现出的独特的父系遗传特性，为甜瓜种子纯度鉴定提供了优良的检测载体，具有以下优越性：(1)父系遗传，通过父本材料的花粉进行传播，可鉴定、追溯品种的父本来源；(2)单亲遗传，检测结果清晰明了，可快速判断品种纯度；(3)多态性高，甜瓜线粒体基因组庞大，存在大量重复序列，序列变异速度高于核基因组；(4)表现中性，遗传方式独立于核基因组，并不与不良性状存在连锁关系；(5)拷贝数多，相对其他核基因组分子标记所具有更高的稳定性及检测效率。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

本发明提供了一种用于甜瓜种子纯度检测的特异性序列，所述序列选自以下序列组中的一组或两组以上：