[发明专利]酵母表达的柯萨奇病毒A10病毒样颗粒及其应用

权利要求书

1.一种用于共表达柯萨奇病毒A10型P1蛋白和3CD蛋白的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸包括编码柯萨奇病毒A10 型（Coxsackievirus A10, CA10）P1蛋白的多核苷酸序列和编码柯萨奇病毒A10 型3CD蛋白的多核苷酸序列，其中所述编码柯萨奇病毒A10型P1蛋白的多核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，并且所述柯萨奇病毒A10型3CD蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2. 如权利要求1所述的多核苷酸，其特征在于，所述编码柯萨奇病毒A10 型3CD蛋白的多核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

3.如权利要求1所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸为适合酵母表达的基因序列。

4.如权利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，所述酵母为毕赤酵母。

5.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体含有权利要求1所述的多核苷酸。

6.如权利要求5所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体为以pPink-HC载体为骨架。

7.一种基因工程细胞，其特征在于，所述的基因工程细胞含有权利要求5所述的表达载体，或者在基因组中整合有权利要求1所述的多核苷酸，并且所述基因工程细胞不是动物和植物品种。

8.如权利要求7所述的细胞，其特征在于，所述基因工程细胞为真核细胞，并且所述细胞的基因组中整合有柯萨奇病毒A10型外壳蛋白的表达盒；或者所述细胞中含有表达载体，所述表达载体含有柯萨奇病毒A10型外壳蛋白的表达盒；

所述基因工程细胞在胞内表达所述柯萨奇病毒A10型外壳蛋白，且所述外壳蛋白自组装形成病毒样颗粒(VLP)。

9.如权利要求7所述的细胞，其特征在于，所述细胞为酵母细胞。

10.如权利要求9所述的细胞，其特征在于，所述酵母细胞为毕赤酵母细胞。

11.如权利要求8所述的细胞，其特征在于，所述的表达盒包括5'至3'可操作地连接的以下元件：启动子、起始密码子、所述外壳蛋白的ORF序列和终止密码子。

12.一种柯萨奇病毒A10型病毒样颗粒，其特征在于，所述病毒样颗粒由权利要求7所述的基因工程细胞表达。

13.一种药物组合物，其特征在于，所述的组合物含有权利要求1所述的多核苷酸、权利要求5所述的表达载体、权利要求7所述的基因工程细胞、或权利要求12所述的病毒样颗粒(VLP)，以及药学上可接受的载体和/或辅料。

14.如权利要求13所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括疫苗组合物。

15. 一种制备柯萨奇病毒A10 型病毒样颗粒(VLP)的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：

(1)培养权利要求7所述的基因工程细胞，从而在所述基因工程细胞内表达柯萨奇病毒A10 型前体衣壳蛋白P1蛋白和3CD蛋白，并自组装形成具有免疫原性的病毒样颗粒(VLP)；

(2)分离所述的具有免疫原性的病毒样颗粒(VLP)。