[发明专利]酵母表达的柯萨奇病毒A10病毒样颗粒及其应用

说明书

本发明提供了一种酵母表达的柯萨奇病毒A10病毒样颗粒及其应用。具体的，本发明将柯萨奇病毒A10型P1蛋白和3CD蛋白的基因序列转化入酵母细胞中进行表达，获得了柯萨奇病毒A10型的新型病毒样颗粒，且该病毒样颗粒的表达量高、免疫原性强、并显示了良好的特异性。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体地说，本发明涉及酵母表达的柯萨奇病毒A10病毒样颗粒及其应用。

背景技术

手足口病(Hand,foot and mouth disease,HFMD)是由肠道病毒引起的一种传染性疾病，主要感染5岁以下的儿童。HFMD主要引起一些温和的症状，表现为发热及手、足、口部位出现疱疹或者溃疡，通常能够自愈；但是HFMD也能引起一些严重的并发症，比如无菌性脑膜炎、肺水肿等，如不及时救治，甚至会导致死亡。

传统上，引起HFMD的病原主要是EV71和CA16，近年来，CA6和CA10引起的病例逐渐增加。2008年，CA6和CA10共流行在芬兰引起了HFMD的爆发，同年，新加坡HFMD疫情的主要致病原之一被证实是CA6和CA10。一个法国的HFMD监测系统显示，在2010年，当地CA6和CA10引起的HFMD病例分别达到28％和39.9％。在中国深圳、石家庄、武汉等地，CA10与CA6、EV71、CA16一起成为HFMD的主要致病原。虽然CA10引起的HFMD正在逐渐增加，但是当前大部分研究仍然针对EV71和CA16，其中EV71灭活疫苗已经上市，CA16也有多种候选疫苗可用，对CA10的研究仍然很少，尚无疫苗可用。因此，本领域技术人员致力于开发能够特异性针对CA10的疫苗用于手足口病的预防。

发明内容

本发明的目的在于提供一种柯萨奇病毒A10型的新型病毒样颗粒、其制备方法及应用。

本发明的第一方面，提供了一种多核苷酸，所述多核苷酸包括编码柯萨奇病毒A10型(Coxsackievirus A10,CA10)P1蛋白的多核苷酸序列，和/或编码柯萨奇病毒A10型3CD蛋白的多核苷酸序列。

在另一优选例中，所述柯萨奇病毒A10型P1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

在另一优选例中，所述柯萨奇病毒A10型3CD蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

在另一优选例中，所述编码柯萨奇病毒A10型P1蛋白的多核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示。

在另一优选例中，所述编码柯萨奇病毒A10型3CD蛋白的多核苷酸序列如SEQ IDNO.4所示。

在另一优选例中，所述多核苷酸为适合酵母(优选为毕赤酵母)表达的基因序列。

本发明的第二方面，提供了一种表达载体，所述表达载体含有本发明第一方面所述的多核苷酸。

在另一优选例中，所述表达载体为以pPink-HC载体为骨架。

本发明的第三方面，提供了一种基因工程细胞，所述的基因工程细胞含有本发明第二方面所述的表达载体，或者在基因组中整合有本发明第一方面所述的多核苷酸。

在另一优选例中，所述基因工程细胞为真核细胞，并且所述细胞的基因组中整合有柯萨奇病毒A10型外壳蛋白的表达盒；或者所述细胞中含有表达载体，所述表达载体含有柯萨奇病毒A10型外壳蛋白的表达盒；

所述基因工程细胞在胞内表达所述柯萨奇病毒A10型外壳蛋白，且所述外壳蛋白自组装形成病毒样颗粒(VLP)。

在另一优选例中，所述细胞为酵母细胞，优选为毕赤酵母细胞。

在另一优选例中，所述的表达盒包括5'至3'可操作地连接的以下元件：启动子、起始密码子、所述外壳蛋白的ORF序列和终止密码子。