[发明专利]一种固定化的荧光标记细胞色素c、其制备方法及用途在审
| 申请号： | 201710166931.2 | 申请日： | 2017-03-20 |
| 公开（公告）号： | CN106950209A | 公开（公告）日： | 2017-07-14 |
| 发明（设计）人： | 唐乾;曹洪玉;王立皓;郑学仿 | 申请（专利权）人： | 大连大学 |
| 主分类号： | G01N21/64 | 分类号： | G01N21/64 |
| 代理公司： | 大连智高专利事务所(特殊普通合伙)21235 | 代理人： | 胡景波 |
| 地址： | 116622 辽宁省*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 固定 荧光 标记 细胞 色素 制备 方法 用途 | ||
1.一种荧光标记细胞色素c的固定化方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)从微生物中提取纯化细胞色素c；
(2)将细胞色素c与荧光素反应制备荧光标记的细胞色素c，除去游离荧光素；
(3)用异丙醇铝制备铝胶母液；
(4)将步骤(2)和(3)的产物混匀，涂布固相载体；
其中，所述细胞色素c来自光合细菌。
2.根据权利要求1所述荧光标记细胞色素c的固定化方法，其特征在于，所述细胞色素c包含的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
3.根据权利要求2所述的固定化方法，其特征在于，步骤(1)具体为：将菌体冻融后，超声破碎，上清液过离子交换色谱，洗脱液再过分子筛层析，获得电泳纯的细菌源细胞色素c。
4.根据权利要求1或2所述的固定化方法，其特征在于，步骤(2)具体为：将1mg细胞色素c溶解于NaHCO3溶液中，加入5μl 20mM的荧光素琥珀酰亚胺酯，混匀，4℃反应2h，0.01M的pH7.4磷酸盐缓冲液透析，除去未结合的游离荧光素二乙酸酯。
5.根据权利要求1或2所述的固定化方法，其特征在于，步骤(3)具体为：取2g异丙醇铝，加入44ml沸水中，80℃搅拌45min，加入1.2mL 1M的HCl，煮沸1h，冷却至4℃。
6.根据权利要求1或2所述的固定化方法，其特征在于，步骤(4)具体为：取等量的步骤(2)和(3)的产物混匀，4℃反应1h，均匀涂覆于固相载体表面。
7.根据权利要求1-6任一所述固定化方法制备的固定化荧光标记细胞色素c。
8.权利要求7所述固定化的荧光标记细胞色素c在制备检测生物样品中NO的检测试剂中的用途。
9.权利要求7所述固定化的荧光标记细胞色素c在制备检测生物样品中NO的检测装置中的用途。
10.如权利要求9所述的用途，其中所述的装置为细胞色素c珠、细胞色素c片、细胞色素c容器或细胞色素c传感器。
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