[发明专利]辅助选择含有隐性单基因hd桃品种的分子标记及其选育方法和应用

权利要求书

1.一种辅助选择含有隐性单基因hd桃品种的分子标记，其特征在于：

所述的分子标记包含有变异特征引物序列

正向引物CACTA-INS-F引物序列为5’-CTTTGACTAGGATAACAC-3’，

反向引物CACTA-INS-R引物序列为5’-AATGGCATGGACAACGA-3’；

及无变异特征引物序列

正向引物WILD-F引物序列为5’-ACATCAAACGGCAATCAATA-3’，

反向引物WILD-R引物序列为5’-TTAGCCACGAAGGTTACTCA-3’。

2.根据权利要求1所述辅助选择含有隐性单基因hd桃品种的分子标记，其特征在于：所述分子标记的主效位点为PpYUC11，该基因位于第6条染色体、且距离预测的第6条染色体上着丝粒的位置小于800k。

3.一种利用权利要求1或2所述的辅助选择含有隐性单基因hd桃品种的分子标记选育SH肉质桃品种的方法，其特征在于：

(1)选取自然群体或育种圃单株为材料，分别提取DNA；然后以引物对WILD-F、WILD-R以及CACTA-INS-F、CACTA-INS-R所示的引物序列为引物分别进行PCR扩增，再分别进行电泳分离分析，并结合乙烯测定进一步确定含有隐性基因hd的品种，备用；

(2)将步骤(1)确定的基因型为hdhd的SH肉质桃品种与基因型为Hdhd的非SH肉质桃品种进行杂交，得到后代F₁；

(3)提取步骤(2)所得后代F₁单株的DNA，以引物对WILD-F、WILD-R以及CACTA-INS-F、CACTA-INS-R所示引物序列为引物，对其分别进行PCR扩增，扩增后分别测序，将两对引物的PCR扩增产物分别进行琼脂糖凝胶电泳，凝胶经染色后在凝胶扫描仪中检测扩增条带，根据两次电泳得到的带型来确定样本的基因型；并结合乙烯测定，选择基因型为hdhd的SH肉质桃品种单株，即得到所述的SH肉质桃品种。

4.根据权利要求3所述的利用辅助选择含有隐性单基因hd桃品种的分子标记选育SH肉质桃品种的方法，其特征在于，所述的以引物对WILD-F、WILD-R以及CACTA-INS-F、CACTA-INS-R进行PCR扩增的反应体系如下：

用正向引物WILD-F与反向引物WILD-R检测野生型基因是否发生突变；并利用正向引物CACTA-INS-F与反向引物CACTA-INS-R检测突变型基因是否有CACTA转座子插入；

反应体系为20μl：10μmol·L^-1上下游引物各1μl，10×PCR Buffer for KOD 2μl，KOD-Plus-Neo(1U/μl)0.5μl，2mM dNTPs 2μl，25mM MgSO₄ 1.5μl，(50ng/μl)的DNA模板2μl以及ddH₂O 10μl。

5.根据权利要求4所述的利用辅助选择含有隐性单基因hd桃品种的分子标记选育SH肉质桃品种的方法，其特征在于，所述的以引物对WILD-F、WILD-R以及CACTA-INS-F、CACTA-INS-R进行PCR扩增的反应程序如下：

反应程序为：95℃变性2min；35个循环95℃30s，56℃30s，68℃2min；扩增完成后在4℃条件下保存，备用。