[发明专利]一种联合检测急性心肌梗死生物标志物的试剂盒

权利要求书

1.一种联合检测急性心肌梗死生物标志物的试剂盒，其特征是包括：工作微球探针溶液、人cTn I系列梯度标准品溶液、人CK-MB系列梯度标准品溶液、人MYO系列梯度标准品溶液，三联急性心肌梗死生物标志物单抗溶液；100×稀释的链霉亲和素藻红蛋白溶液和200×稀释的生物素化鼠抗人二抗IgG溶液；

所述工作微球探针溶液用下述方法制成：

(1)取编码为35,42和52号的羧基荧光编码微球分别置于三支的离心管中，用100μL pH7.4的PBS重悬后，使所述羧基荧光编码微球的浓度为1.25×10⁷个微球/mL，分别加入100μLpH 8.0 0.1mol/L的PBS，分别加入新鲜配制的10μL浓度为50mg/mL的EDC水溶液和10μL浓度为50mg/mL的S-NHS水溶液，室温下搅拌10-30min，使羧基荧光编码微球活化；

所述EDC为1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳二亚胺盐酸盐的简称；

所述S-NHS为N-羟基琥珀酰亚胺磺酸钠盐的简称；

(2)在装有活化后的35号羧基荧光编码微球的离心管中加入10μg cTn I；在装有活化后的42号羧基荧光编码微球的离心管中加入10μg CK-MB；在装有活化后的52号羧基荧光编码微球的离心管中加入10μg MYO；分别加pH 7.4的PBS使终体积到500μL，室温下以500-800rpm旋涡混匀2-4h，以12,000-16,000g离心3-6min，弃去上清液；分别加入100μL封闭缓冲液重悬并封闭交联微球保持20min；离心，弃上清，用pH 7.4的PBS清洗；

所述cTn I为肌钙蛋白的简写；CK-MB为肌酸激酶同工酶的简写；MYO为肌红蛋白的简写；

所述封闭缓冲液为：PBS中含有1wt％BSA,0.05wt％叠氮钠，pH 7.4；

(3)分别用150μL储备缓冲液重悬步骤(2)获得的微球，用血球计数器确定浓度，用储备缓冲液稀释到3000个/μL，分别得到偶联有cTn I探针微球溶液、偶联有CK-MB探针微球溶液和偶联有MYO探针微球溶液；

(4)分别取偶联有cTn I探针微球溶液、偶联有CK-MB探针微球溶液和偶联有MYO探针微球溶液50μL，混合，得工作微球探针溶液，工作微球探针溶液中偶联有cTn I探针微球的浓度为1000个/μL，偶联有CK-MB探针微球的浓度为1000个/μL，偶联有MYO探针微球的浓度为1000个/μL，4℃储存；

所述储备缓冲液为PBS中含有0.1wt％BSA,0.02wt％吐温-20,0.05wt％叠氮钠,pH7.4。

2.根据权利要求1所述的一种联合检测急性心肌梗死生物标志物的试剂盒，其特征是所述人cTn I系列梯度标准品溶液是用pH＝7.4的PBS缓冲液为溶剂，配制的浓度分别为0、0.013、0.064、0.32、1.6、8和40μg/L的溶液。

3.根据权利要求1所述的一种联合检测急性心肌梗死生物标志物的试剂盒，其特征是所述人CK-MB系列梯度标准品溶液是用pH＝7.4的PBS缓冲液为溶剂，配制的浓度分别为0、0.064、0.32、1.6、8、40和200μg/L的溶液。

4.根据权利要求1所述的一种联合检测急性心肌梗死生物标志物的试剂盒，其特征是所述人MYO系列梯度标准品溶液是用pH＝7.4的PBS缓冲液为溶剂，配制的浓度分别为0、0.16、0.8、4、20、100和500μg/L的溶液。