[发明专利]固定化酶应用于澄清型南瓜-山楂复合汁的加工法

权利要求书

1.固定化果胶酶-糖化酶的制备方法，其特征是：以海藻酸钠/氧化石墨烯为载体，包括如下步骤：

A）、海藻酸钠/氧化石墨烯小球的活化：

将海藻酸钠/氧化石墨烯凝胶小球加入到容器中，然后加入N,N’-二环己基碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺以及加入N,N’-二甲基甲酰胺、三乙胺，混合均匀后，室温下磁力搅拌，过滤，洗涤产物，得到活化后的海藻酸钠/氧化石墨烯复合凝胶小球；

N,N’-二环己基碳二亚胺：海藻酸钠=1:1.12~1.21的摩尔比，N-羟基琥珀酰亚胺：海藻酸钠=1: 1.12~1.21的摩尔比；

B）、果胶酶和糖化酶混合酶液配制：

将果胶酶用缓冲液配制成酶活为250~350U/ml的果胶酶液，用缓冲液稀释糖化酶，得酶活为900~1100U/ml的糖化酶液；

按照果胶酶：糖化酶=5.8~6.2:5的酶活力，将果胶酶液和糖化酶液混合，得混合酶液；

C）、果胶酶-糖化酶的固定化：

取1g步骤A）所得的活化后的海藻酸钠/氧化石墨烯小球加入13~17mL步骤B）所得的混合酶液，25~55℃水浴震荡反应15~50min，用去离子水冲洗，过滤，得固定化果胶酶-糖化酶。

2.根据权利要求1所述的固定化果胶酶-糖化酶的制备方法，其特征是海藻酸钠/氧化石墨烯凝胶小球的制备方法为：

将2g海藻酸钠加入到超声分散均匀的氧化石墨烯水溶液室温下磁力搅拌，然后超声从而使海藻酸钠和氧化石墨烯充分混合，接着静置过夜，除去气泡；氧化石墨烯与海藻酸钠的质量比为2~8 %；

将上述配置好的海藻酸钠/氧化石墨烯混合溶液滴加到40~50 mL的质量浓度 10%的氯化钙溶液中，从而凝胶，再于4±1℃静置过夜，接着用去离子水洗涤，真空干燥，得到海藻酸钠/氧化石墨烯复合凝胶小球。

3.根据权利要求2所述的固定化果胶酶-糖化酶的制备方法，其特征是：所述海藻酸钠/氧化石墨烯凝胶小球的制备方法中，氧化石墨烯水溶液的体积量为100ml；将上述配置好的海藻酸钠/氧化石墨烯混合溶液滴加到氯化钙溶液中的时间为50~70分钟。

4.根据权利要求1~3任一所述的固定化果胶酶-糖化酶的制备方法，其特征是：所述步骤A）中，采用乙醇：环己烷=1:1的混合液进行洗涤。

5.根据权利要求1~3任一所述的固定化果胶酶-糖化酶的制备方法，其特征是：所述步骤A）中，每1g海藻酸钠/氧化石墨烯凝胶小球配用10±2mL的N,N’-二甲基甲酰胺，0.3±0.1ml的三乙胺。

6.根据权利要求1~3任一所述的固定化果胶酶-糖化酶的制备方法，其特征是：所述步骤B）中的缓冲液为0.25mol/L、 pH 3.0~5.0的乙酸–乙酸钠缓冲液。

7.利用如权利要求1~6任一所述方法制备而得的固定化果胶酶-糖化酶进行的澄清型南瓜-山楂复合汁的加工方法，其特征是包括如下步骤：

1）、将南瓜制备所得的南瓜汁以及山楂制备所得的山楂汁进行混合，得pH为4.5±0.2的复合果蔬汁；

2）、在100mL复合果蔬汁加入0.1g~0.5g的固定化果胶酶-糖化酶，于30~70℃水浴振荡20~120min；

3）、将步骤2）所得的酶解后复合果蔬汁进行过滤；

4）、将步骤3）所得的滤液进行离心、高温瞬时杀菌、无菌包装，得澄清型南瓜-山楂复合汁。

8.根据权利要求7所述的澄清型南瓜-山楂复合汁的加工方法，其特征是所述步骤1）为：

将南瓜条热烫20±5分钟，以料水比l：2打浆，然后过滤，得南瓜汁；

将山楂去核切片，然后置于-14~-18℃冷冻9~11小时，在25~30℃下，料水比l：2浸提2±0.5小时，过滤，得山楂汁；

在南瓜汁中加入山楂汁，直至所得的复合果蔬汁的pH为4.5。