[发明专利]固定化酶应用于澄清型南瓜-山楂复合汁的加工法

说明书

本发明公开了一种固定化果胶酶‑糖化酶的制备方法，将用凝胶法制备得到的海藻酸钠/氧化石墨烯凝胶小球，用N,N’‑二环已基碳二亚胺(DCC)/N‑羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化，得到羧基活化的活性小球，然后果胶酶和糖化酶混合酶通过酰胺键偶联于小球上，得到高活力的固定化果胶酶‑糖化酶。本发明还同时公开了利用上述方法制备而得的固定化果胶酶‑糖化酶进行的澄清型南瓜‑山楂复合汁的加工方法：经过原料(南瓜、山楂)的挑选、清洗、热烫、打浆、固定化果胶酶‑糖化酶酶解处理、过滤、离心、杀菌、无菌包装工序；制得澄清型南瓜‑山楂复合汁。

技术领域

本发明属于食品加工技术领域，公开了一种海藻酸钠/氧化石墨烯小球为载体的固定化果胶酶-糖化酶的制备法及应用于澄清型南瓜-山楂复合汁的加工方法。

背景技术

南瓜和山楂的营养比较丰富，其中所含的营养物质对人体益处多多。利用南瓜和山楂制作成的复合果蔬汁饮料是一款很好的保健产品。南瓜和山楂中富含丰富的果胶和淀粉物质，制作南瓜-山楂复合果蔬汁过程中带入的果肉碎块以及溶入的果胶、淀粉物质等常常引起果蔬汁贮藏期间的混浊、沉淀，导致果蔬汁品质的恶化，明显地缩短了产品的贮存期。

果胶酶是水果加工中最重要的酶，应用果胶酶处理破碎果实，可加速果汁过滤，促进澄清。糖化酶，又称葡萄糖淀粉酶[Glucoamylase,(EC.3.2.1.3.)]它能把淀粉从非还原性未端水解a-1.4葡萄糖苷键产生葡萄糖，也能缓慢水解a-1.6葡萄糖苷键，转化为葡萄糖。同时也能水解糊精，糖原的非还原末端释放β-D-葡萄糖。

所以将南瓜-山楂复合果蔬汁用果胶酶和糖化酶进行处理，不仅可以提高果蔬汁的澄清度，还可以促使果蔬汁中的多糖类物质转变为寡糖，便于人体消化吸收。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种固定化果胶酶-糖化酶及用于澄清型南瓜-山楂复合汁的加工方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种固定化果胶酶-糖化酶的制备方法，以海藻酸钠/氧化石墨烯为载体，包括如下步骤：

A)、海藻酸钠/氧化石墨烯小球的活化：

将海藻酸钠/氧化石墨烯凝胶小球加入到容器中，然后加入N,N’-二环己基碳二亚胺(DCC)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)以及加入N,N’-二甲基甲酰胺(DMF)、三乙胺，混合均匀后，室温下磁力搅拌(搅拌时间为8～12小时，即，过夜)，过滤，洗涤产物(即，滤饼，目的是除去未反应试剂)，得到活化后的海藻酸钠/氧化石墨烯复合凝胶小球；

N,N’-二环己基碳二亚胺(DCC)：海藻酸钠＝1:1.12～1.21的摩尔比，N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)：海藻酸钠＝1:1.12～1.21的摩尔比；

B)、果胶酶和糖化酶混合酶液(酶活力比较佳为6:5)配制：

将果胶酶用缓冲液配制成酶活为250～350U/ml(较佳300U/ml)的果胶酶液，用缓冲液稀释糖化酶，得酶活为900～1100U/ml(较佳为1000U/ml)的糖化酶液；

按照果胶酶：糖化酶＝5.8～6.2:5(较佳为6:5)的酶活力，将果胶酶液和糖化酶液混合，得混合酶液；

C)、果胶酶-糖化酶的固定化：

取1g步骤A)所得的活化后的海藻酸钠/氧化石墨烯小球加入13～17mL(较佳为15mL)步骤B)所得的混合酶液，25～55℃水浴震荡反应15～50min，用去离子水冲洗(反复冲洗3遍)，过滤，得固定化果胶酶-糖化酶。

该固定化果胶酶-糖化酶也可真空冷冻干燥后进行保藏。

作为本发明的固定化果胶酶-糖化酶的制备方法的改进：

海藻酸钠/氧化石墨烯凝胶小球的制备方法为：