[发明专利]一种寨卡病毒的可视化检测方法

权利要求书

1.一种寨卡病毒的可视化检测方法，该方法包括以下步骤：

(1)取寨卡病毒，按北京全式金生物科技有限公司生产的Easy Pure Viral DNA/RNA Kit的说明书提取寨卡病毒核酸；

(2)以步骤(1)得到的寨卡病毒核酸为模板，采用环介导恒温扩增方法扩增寨卡病毒NS5基因的RNA片段，获得核酸扩增产物；所述的环介导恒温扩增方法的引物由一对外引物、一对内引物和一对环引物组成，其中，

所述的一对外引物为：

Zika-F3：5’-TGGGATGTGGTGACTGGA-3’(SEQ NO.1)；

Zika-B3：5’-TGCATTGCTACGAACCTTGT-3’(SEQ NO.2)；

所述的一对内侧引物为：

Zika-BIP：5’-GTCTGGCACCCTAGTGTCCACTCACAGGAATAGCCATGACCG-3’(SEQ NO.3)；

Zika-FIP：5’-AGGCACTCGTCAGGTTATGAGCTACAGACTCGTGGCCGTT-3’(SEQ NO.4)；

所述的一对环引物为：

Zika-LF：5’-TGACCATACGGTGTGGTGT-3’(SEQ NO.5)；

Zika-LB：5’-ATGGTCTCTTCCTGGTTGTGG-3’(SEQ NO.5)；

上述环引物Zika-LB5’端标记生物素(Biotin)，环引物Zika-LF5’端标记6-羧基荧光素(6-FAM)；

(3)将核酸层析试纸垂直插入所述的核酸扩增产物中，层析5-10min，然后按以下方法判读结果：阳性(+)：核酸层析试纸条的检测区和质控区分别出现一条红色条带；阴性(-)：核酸层析试纸条的质控区出现一条红色条带，而检测区则没有条带；无效：核酸层析试纸条的检测区和质控区均未出现条带；其中，

所述的核酸层析试纸条包括条状的塑料支撑片，该塑料支撑片的一表面自一头至另一头依次设有样品垫、聚酯纤维素膜、硝酸纤维素膜和吸水垫，其中，所述聚酯纤维素膜上喷涂有一层由氯金酸制成的胶体金颗粒上制得的链霉亲和素包被的AuNPs金纳米粒子；所述硝酸纤维素膜上分布有检测区和质控带区，其中检测区是在硝酸纤维素膜上喷涂生物素亲和蛋白形成，质控区是在硝酸纤维素膜上喷涂6-羧基荧光素抗体形成。

2.根据权利要求1所述的一种寨卡病毒的可视化检测方法，其特征在于，所述的环介导恒温扩增方法的反应体系为：12.5μL2×反应缓冲液，1μL酶溶液，浓度为10μM的一对外引物各0.5μL、浓度为10μM的一对内引物各4μL，浓度为10μM的一对环引物各2μL，RNA模板1μL；所述的环介导恒温扩增方法的反应条件为：65℃温育60min，85℃温育5min。