[发明专利]一种寨卡病毒的可视化检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物化学领域，具体涉及包含核酸、酶或微生物的测定或检验方法，特别是涉及寨卡病毒的检测方法。

背景技术

寨卡病毒属于黄病毒科，黄病毒属，单股正链RNA病毒，其主要的传播媒介是埃及伊蚊和白纹伊蚊。1947年首次在乌干达从恒河猴体内被发现寨卡病毒，1952年在乌干达和坦桑尼亚的人体中分离到。2007年以前，世界仅报告14例ZIKV病散发病例，2007年首次在太平洋岛国密克罗尼西亚的雅普岛发现寨卡病毒暴发疫情之后，出现ZIKV感染病例和暴发疫情的国家及地区增加明显，已经在非洲、东南亚和美洲等地造成多次暴发流行。2015年5月，巴西报告首例寨卡病毒感染病例；当年10月份，巴西报告新生儿小头畸形数量处于明显上升，时空分布与寨卡病毒流行区相吻合。截至2016年1月2日，巴西卫生部官方统计数据显示，巴西因寨卡病毒所致的疑似新生儿小头畸形病例已达3174例，其中已有38例死亡，2月初该数字已达4783例。研究表明，除了引起小头畸形以外，寨卡病毒感染还和格林-巴利综合征有也有着密切的联系。疫情的快速蔓延以及与小头畸形之间的可能因果关系，引起了国际社会的广泛关注。

寨卡病毒全基因长度约为11Kb，直径40～70nm，有包膜，包含10794个核苷酸，编码3419个氨基酸，寨卡病毒基因编码3个结构蛋白：衣壳蛋白(C)、膜前体蛋白(prM)和包膜蛋白(M)，以及7个非结构蛋白(NS1，NS2a，NS2b，NS3，NS4a，NS4b和NS5)。目前，国内外对寨卡病毒的诊断方法，主要还是依靠病毒培养、血清学试验、常规的RT-PCR检测及实时荧光定量PCR，其中，血清学试验、组织培养具有灵敏度低、免疫交叉反应以及周期长等缺点；而RT-PCR也存在容易污染、耗时长的不足，实时荧光PCR技术因为其仪器设备昂贵，不利于一般检测机构的检测及大样本量检测。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种寨卡病毒的可视化检测方法，该方法具有准确、快速和直观的优点。

本发明解决上述问题的技术方案如下：

一种寨卡病毒的可视化检测方法，该方法包括以下步骤：

(1)取寨卡病毒，按北京全式金生物科技有限公司生产的Easy Pure Viral DNA/RNA Kit的说明书提取寨卡病毒核酸；

(2)以步骤(1)得到的寨卡病毒核酸为模板，采用环介导恒温扩增方法(LAMP)扩增寨卡病毒NS5基因的RNA片段，获得核酸扩增产物；所述的环介导恒温扩增方法的引物由一对外引物、一对内引物和一对环引物组成，其中，

所述的一对外引物为：

Zika-F3：5’-TGGGATGTGGTGACTGGA-3’(SEQ NO.1)；

Zika-B3：5’-TGCATTGCTACGAACCTTGT-3’(SEQ NO.2)；

所述的一对内侧引物为：

Zika-BIP：5’-GTCTGGCACCCTAGTGTCCACTCACAGGAATAGCCATGACCG-3’(SEQ NO.3)；

Zika-FIP：5’-AGGCACTCGTCAGGTTATGAGCTACAGACTCGTGGCCGTT-3’(SEQ NO.4)；

所述的一对环引物为：

Zika-LF：5’-TGACCATACGGTGTGGTGT-3’(SEQ NO.5)；

Zika-LB：5’-ATGGTCTCTTCCTGGTTGTGG-3’(SEQ NO.5)；

上述环引物Zika-LB5’端标记生物素(Biotin)，环引物Zika-LF5’端标记6-羧基荧光素(6-FAM)；

(3)将核酸层析试纸垂直插入所述的核酸扩增产物中，层析5-10min，然后按以下方法判读结果：阳性(+)：核酸层析试纸条的检测区和质控区分别出现一条红色条带；阴性(-)：核酸层析试纸条的质控区出现一条红色条带，而检测区则没有条带；无效：核酸层析试纸条的检测区和质控区均未出现条带；其中，

所述的核酸层析试纸条包括条状的塑料支撑片，该塑料支撑片的一表面自一头至另一头依次设有样品垫、聚酯纤维素膜、硝酸纤维素膜和吸水垫，其中，所述聚酯纤维素膜上喷涂有一层由氯金酸制成的胶体金颗粒上制得的链霉亲和素包被的AuNPs金纳米粒子；所述硝酸纤维素膜上分布有检测区和质控区，其中检测区是在硝酸纤维素膜上喷涂生物素亲和蛋白形成，质控区是在硝酸纤维素膜上喷涂6-羧基荧光素抗体形成。