[发明专利]一种芫花茎段外植体初代组织培养方法

权利要求书

1.一种芫花茎段外植体初代组织培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）芫花外植体的选取：采集生长健壮，腋芽饱满，无病虫害的芫花当年生枝条，去除全部叶片，剪截成8~10cm带腋芽茎段作为外植体；

（2）芫花外植体的处理：将外植体用洗衣粉溶液浸泡洗涤15~20分钟，接着用流水冲洗8~12小时，在无菌环境下将外植体剪成4-5cm茎段进行消毒处理；消毒后用无菌水冲洗，将茎段剪成1.5~2.5cm的长度，接入芫花茎段外植体初代组织培养的培养基中；所述消毒方法为先采用乙醇溶液进行消毒，再将茎段放入升汞加吐温的混合溶液浸泡消毒；所述乙醇溶液体积分数70~75%，消毒时间为30~45s，升汞加吐温混合溶液为1 g•L^-1升汞加3-5滴吐温80，浸泡时间为10~14min；

（3）芫花外植体的培养：将步骤（2）接入初代组织培养基中的外植体置于培养室的培养架进行光照培养，直至诱导丛生芽萌发；

所述初代组织培养基包括如下组分：MS+0.1mg·L^-1 NAA+1.0-1.5mg·L^-1 ZT，加入蔗糖25-30g/L、琼脂6.5-7g/L，调整酸碱度至pH=5.7-5.8。

2.根据权利要求1所述的芫花茎段外植体初代组织培养方法，其特征在于，所述初代组织培养基包括如下组分：MS+0.1mg·L^-1 NAA+1.5mg·L^-1 ZT，加入蔗糖30g/L、琼脂7g/L，调整酸碱度至pH=5.8。

3.根据权利要求1所述的芫花茎段外植体初代组织培养方法，其特征在于，步骤（3）所述光照培养的温度22~25℃，光照强度2000~3000lx，相对湿度70-75%，光周期14h昼∕10h夜。

4.根据权利要求1所述的芫花茎段外植体初代组织培养方法，其特征在于，步骤（3）所述光照培养的时间25~30d。