[发明专利]一种芫花茎段外植体初代组织培养方法

说明书

本发明公开了一种芫花茎段外植体初代组织培养方法，包括如下步骤：(1)芫花外植体的选取：采集芫花当年生枝条，去除全部叶片，剪截成带腋芽茎段作为外植体；(2)芫花外植体的处理：将外植体用洗衣粉溶液浸泡洗涤，接着用流水冲洗，进行消毒处理，接入芫花茎段外植体初代组织培养的培养基中；(3)芫花外植体的培养：将接入初代培养基中的外植体置于培养室的培养架进行光照培养，直至诱导丛生芽萌发。本发明采用茎段外植体诱导丛生芽，可以简单、快捷的获得芫花组培苗，培养周期明显缩短，培养成功率明显提高，并且萌芽率高，玻璃化率低。

技术领域

本发明涉及植物初代组织培养，具体涉及一种芫花茎段外植体初代组织培养方法。

背景技术

芫花(Daphne genkwa Sieb.et Zucc.)为瑞香科瑞香属落叶灌木，其花朵锦簇、花色艳丽，具有较高的观赏价值，为我国优良野生花卉资源。同时也是我国重要的中药材和生物农药。

从20世纪60年代开始，尤其是90年代以后，芫花的生境遭到严重破坏，种群分布范围缩小，居群数量及个体数量急剧下降，其野生可利用资源逐渐减少。研究芫花的繁殖技术成为保护和利用该植物资源的迫切要求。

芫花一般采用播种方法进行繁殖，但种子繁殖其后代性状发生分离，无法保持母本植株的优良性状。芫花的扦插繁殖，生根成活率低，加之穗源少，繁殖效率低，不能实现快速大量繁殖。采用组织培养方法繁殖芫花，可保持母本优良性状，为优良单株的快速扩繁提供途径。

目前，关于芫花的研究主要集中在其化学组分及药理作用，以及生物农药的研究上，在繁殖、栽培技术的相关研究较少，其茎段外植体组织培养快繁技术在国内外尚未见报道。

发明内容

发明目的：针对现有技术存在的问题，本发明提供一种芫花茎段外植体初代组织培养方法，该方法采用茎段外植体诱导丛生芽，可以简单、快捷的获得芫花组培苗，培养周期明显缩短，培养成功率明显提高，并且萌芽率高，玻璃化率低。

技术方案：为了实现上述发明目的，如本发明所述一种芫花茎段外植体初代组织培养方法，包括如下步骤：

(1)芫花外植体的选取：采集生长健壮，腋芽饱满，无病虫害的芫花当年生枝条，去除全部叶片，剪截成8～10cm带腋芽茎段作为外植体；

(2)芫花外植体的处理：将外植体用洗衣粉溶液浸泡洗涤15～20min，接着用流水冲洗8～12小时，在无菌环境下将外植体剪成4-5cm茎段进行消毒处理；消毒后用无菌水冲洗，将茎段剪成1.5～2.5cm的长度，接入芫花茎段外植体初代组织培养的培养基中；

(3)芫花外植体的培养：将步骤(2)接入初代培养基中的外植体置于培养室的培养架进行光照培养，直至诱导丛生芽萌发。

其中，步骤(2)所述洗衣粉溶液(洗衣粉为市售的普通洗衣粉)质量体积比为0.2-0.5％，浸泡时间为15～20min，接着用流水冲洗8～12h。通常洗衣粉溶液浸泡时间为20min，流水冲洗时间为12h。芫花茎干表面密被短绒毛，直接进行消毒处理杀菌效果不理想。洗衣粉溶液可有效去除粘黏在茸毛上的污物，改善消毒效果；流水冲洗可进一步洗净粘黏在植物体表或绒毛上的污物，改善消毒效果。

步骤(2)所述消毒为先采用体积百分比浓度为70～75％乙醇溶液进行消毒，再将茎段放入1g·L^-1升汞加3-5滴吐温80的混合溶液浸泡消毒。

进一步地，所述乙醇进行消毒的时间为30-45s，升汞加吐温80混合溶液的浸泡消毒时间为10～14min。吐温80为表面活性剂，可以湿润外植体表面组织，促进杀菌剂充分接触外植体表面组织，达到较好的消毒效果。