[发明专利]菲律宾蛤仔高活性抗肿瘤肽的制备方法及应用

权利要求书

1.菲律宾蛤仔高活性抗肿瘤肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.酶解，取新鲜菲律宾蛤仔，海水吐沙后，放入冰箱冷冻后，开壳取肉，匀浆，料液比1:1，调节pH值2.0，添加胃蛋白酶，加酶量为500～3000U/g，酶解温度31～43℃，酶解时间2～12h，灭酶后离心，取上层清液；

S2.超滤，将步骤S1得到的上层清液进行超滤截留，收集分子量5KDa以下的截留液，纳滤浓缩脱盐，冷冻干燥；

S3.强阳离子交换柱色谱分离，步骤S2中冷冻干燥的产物通过SP Sephadex C-25强阳离子交换柱，缓冲液为含浓度小于等于1mol/L NaCl的乙酸钠-乙酸缓冲液进行线性洗脱，洗脱速度为0.5～1.5mL/min，缓冲液线性洗脱后，在紫外-可见分光光度计280nm处进行检测，分别收集各洗脱峰，透析除盐，冷冻干燥；将干燥后的各组分进行抗肿瘤活性分析，进一步确定目标肽所在的洗脱峰，并对该洗脱组分大量收集，冷冻干燥；

S4.凝胶柱色谱分离，将步骤S3中冷冻干燥后的产物过凝胶柱洗脱，采用Sephadex G-25凝胶柱，流动相为超纯水进行洗脱，洗脱速度为0.5～1.5mL/min，然后在紫外-可见分光光度计280nm处进行检测，分别收集各洗脱峰，透析除盐，冷冻干燥，将干燥后的各组分进行抗肿瘤活性分析，进一步确定目标肽所在的洗脱峰，并对该洗脱组分大量收集，冷冻干燥即得菲律宾蛤仔高活性抗肿瘤肽。

2.如权利要求1所述的菲律宾蛤仔高活性抗肿瘤肽的制备方法，其特征在于，步骤S3及S4中抗肿瘤活性分析采用CCK-8法。

3.如权利要求2所述的菲律宾蛤仔高活性抗肿瘤肽的制备方法，其特征在于，步骤S1中胃蛋白酶的加酶量为1000U/g，酶解温度为37℃，酶解时间为6h。