[发明专利]一种Cas9/RNA系统及其应用

权利要求书

1.一种Cas9/RNA系统，其特征在于：Cas9/RNA系统为筛选标记、Cas9蛋白基因和RNA的编码DNA；其中，Cas9蛋白基因为：编码与RNA结合并对目的基因进行敲除的蛋白质基因；RNA的编码DNA为能够指导Cas9蛋白进行基因切割的RNA的编码DNA。

2.按权利要求1所述的Cas9/RNA系统，其特征在于：所述Cas9蛋白基因为经过密码子优化并能完整编码的Cas9蛋白的基因；RNA的编码DNA为一条或者两条能与Cas9蛋白结合构成二级结构，并指导Cas9蛋白对目的位置或随.机目的位置剪切的RNA的编码DNA。

3.按权利要求1或2所述的Cas9/RNA系统，其特征在于：所述Cas9核苷酸序列如SEQ NO:1所示。

4.一种权利要求1所述的Cas9/RNA系统的应用，其特征在于：所述Cas9/RNA系统在原核、真核或病毒的定点基因或随机基因改造中的应用。

5.按权利要求1所述的Cas9/RNA系统的应用，其特征在于：所述Cas9/RNA系统在制备目的基因被敲除的原核、真核或病毒定点或随机突变中的应用。

6.按权利要求5所述的Cas9/RNA系统的应用，其特征在于：所述Cas9/RNA系统在制备目的基因被敲除的原核、真核或病毒定点连续或随机连续突变中的应用。

7.一种权利要求1所述的基于Cas9/RNA系统的载体，其特征在于：载体为所述Cas9/RNA系统插入骨架载体的限制性内切酶位点，得到载体。

8.一种权利要求6所述的基于Cas9/RNA系统的载体的应用，其特征在于：所述载体在原核、真核或病毒的定点基因或随机基因改造中的应用。

9.按权利要求6所述的基于Cas9/RNA系统的载体的应用，其特征在于：所述载体在在制备目的基因被敲除的原核、真核或病毒定点连续或随机连续突变中的应用。

10.一种藻类基因改造的方法，其特征在于：将所述Cas9/RNA系统或载体导入藻株中，使系统中Cas9蛋白在RNA的指导下，对藻株中核酸序列的待敲除目的基因位点或随机位点进行酶切，酶切后的核酸序列自我修复过程中实现目的位点突变或随机位点突变，而后通过nPCR/RE-NGS联合方式确定突变株；

或，酶切后的核酸序列自我修复，进行目的位点或随机位点突变，而后随着藻株细胞传代培养过程中，实现目的位点或随机位点的连续不断突变，而后通过nPCR/RE-NGS联合方式确定突变株。