[发明专利]可分泌抗C反应蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞、C反应蛋白检测试剂及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种可分泌抗C反应蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞、C反应蛋白检测试剂及其制备方法和应用。上述C反应蛋白检测试剂包括第一抗体和第二抗体，第一抗体为抗C反应蛋白的兔多克隆抗体，第二抗体为抗C反应蛋白的单克隆抗体，分泌第二抗体的杂交瘤细胞保藏在湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学保藏中心，保藏号是CCTCC No：C2016218。本检测试剂的使用兔多克隆抗体与鼠单克隆抗体进行配对，抗体制备方法简单，实验结果表明该检测试剂的特异性好、线性范围宽。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种可分泌抗C反应蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞、C反应蛋白检测试剂及其制备方法和应用。

背景技术

C反应蛋白(C-reaction protein，CRP)最早在1930年由Tillet和Francis发现。最初他们观察到一些急性病人的血清可与肺炎链球菌的荚膜C-多糖发生反应，随后证实能与C-多糖反应的物质是一种蛋白质，因而将这种蛋白质命名为C反应蛋白(C-reactionprotein，CRP)。CRP主要是在白细胞介素(IL-6)等细胞因子调节下，由肝脏合成分泌的一种蛋白质，外周血淋巴细胞亦能合成少量的CRP。CRP以5个相同亚单位形成环状的五聚体，相对分子量为115KD～140KD。电泳分布在慢γ区带，有时可以延伸到β区带，其电泳迁移率易受一些因素影响，如钙离子及缓冲液成分等。

C-反应蛋白(CRP)是急性时相蛋白中变化最显著的一种，也是人体感染的一个重要敏感标志物之一。CRP具有激活补体、增强淋巴细胞活性、促进吞噬细胞功能、清除病理性产物、抑制血小板凝集等作用。近年来，大量研究资料表明，CRP作为炎症因子，虽为非特异性的标志物，但它与某些疾病如感染性疾病、心血管疾病、恶性肿瘤、自身免疫病、抑郁症等疾病的发生发展存在很大的相关性，具体如下：

1、CRP作为急性时相蛋白在各种急性炎症、组织损伤、心肌梗塞、手术创伤、放射性损伤等疾病发作后数小时迅速升高并有成倍增长之势。病变好转时又迅速降至正常，其升高幅度与感染的程度呈正相关。

2、CRP与其它炎症因子的相关性，CRP与其它炎症因子如白细胞总数、红细胞沉降率和多形核白细胞等具有密切相关性。CRP与WBC(白细胞)存在正相关。在炎症反应中起着积极作用使人体具有非特异性抵抗力。在患者疾病发作时CRP可早于WBC而上升，恢复正常也很快，故具有极高的敏感性。

3、CRP可用于细菌和病毒感染的鉴别诊断，一旦发生炎症CRP水平即升高而病毒性感染CRP大都正常。脓毒血症CRP迅速升高，而依赖血培养则至少需要48小时，且其阳性率不高。又如CRP能快速有效地检测细菌性脑膜炎其阳性率达99％。

4、恶性肿瘤患CRP大都升高，如CRP与AFP的联合检测可用于肝癌与肝脏良性疾病的鉴别诊断。CRP测定用于肿瘤的治疗和预后有积极意义。手术前CRP上升，手术后则下降，且其反应不受放疗、化疗和皮质激素治疗的影响，有助于临床评估肿瘤的进程。

目前，临床实验室测定CRP的常规方法主要有胶乳凝集试验和免疫浊度法(如散射、透射比浊法,并且已实现了自动化)以及灵敏度和精确度较高的放射免疫测定方法(RIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和超灵敏的发光法，临床检测主要是免疫比浊法。具体如下：

1、免疫浊度法：当可溶性抗原与相应抗体在两者比例合适时，抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成抗原抗体复合物，使反应液出现浊度，如形成的复合物增加，反应液的浊度随之增加，与一系列的标准品对照，即可计算出受检物的含量。国内CRP试剂盒一般采用免疫比浊法，其优点是操作简单，特异性强，重复性好，但是免疫学中常因抗原过剩而引起的勾状效应，导致假阳产生。