[发明专利]一种新型猪圆环病毒3型的ELISA抗体检测试剂盒及其应用在审
| 申请号： | 201710184107.X | 申请日： | 2017-03-24 |
| 公开（公告）号： | CN108627648A | 公开（公告）日： | 2018-10-09 |
| 发明（设计）人： | 宋长绪;王磊;申翰钦;张乐宜;刘艳玲;梁鹏帅;张鹏飞;刘相聪 | 申请（专利权）人： | 华南农业大学 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68 |
| 代理公司： | 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 | 代理人： | 裘晖;苏运贞 |
| 地址： | 510642 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 抗体检测试剂盒 猪圆环病毒 试剂盒 底物显色液 检测 标准阳性血清 标准阴性血清 血清稀释液 包被抗原 酶标二抗 灵敏性 酶标板 洗涤液 终止液 应用 诊断 保存 监测 成功 | ||
1.一种新型猪圆环病毒3型的ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于：包括以重组PCV3Cap蛋白作为包被抗原的酶标板。
2.根据权利要求1所述的新型猪圆环病毒3型的ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于还包括：PCV3标准阳性血清、PCV3标准阴性血清、酶标二抗、洗涤液、血清稀释液、底物显色液A、底物显色液B和终止液中的一种或至少两种。
3.根据权利要求1所述的新型猪圆环病毒3型的ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于：所述的重组PCV3Cap蛋白具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；或是具有通过突变、删除、插入或取代方式将如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列中的至少1个氨基酸改变的序列。
4.根据权利要求1所述的新型猪圆环病毒3型的ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于：所述的重组PCV3Cap蛋白来自于猪圆环病毒3型核衣壳蛋白。
5.根据权利要求1所述的新型猪圆环病毒3型的ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于，所述的重组PCV3Cap蛋白通过以下步骤制备得到：将编码所述的重组PCV3Cap蛋白的核苷酸序列克隆入表达载体构建重组表达载体；将所述重组表达载体转入表达系统中进行表达，纯化，得到所述的重组PCV3Cap蛋白。
6.根据权利要求1所述的新型猪圆环病毒3型的ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于：所述的以重组PCV3Cap蛋白作为包被抗原的酶标板，通过如下步骤制备得到：将重组PCV3Cap蛋白稀释到2μg/mL，100μL/孔加到酶标板，37℃温育24h；取包被好的酶标板，300μL/孔洗涤液洗板2～5次，2～5分钟/次；再加入150μL/孔封闭液，37℃温育2h；取封闭后的酶标板，300μL/孔洗涤液洗板2～5次，2～5分钟/次，制备得到以重组PCV3Cap蛋白作为包被抗原的酶标板。
7.根据权利要求1所述的新型猪圆环病毒3型的ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于：所述的封闭液为含3％明胶的PBST缓冲液。
8.根据权利要求1所述的新型猪圆环病毒3型的ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于：所述的酶标二抗为HRP标记的兔抗猪IgG抗体。
9.权利要求1～8任一项所述的新型猪圆环病毒3型的ELISA抗体检测试剂盒的应用，其特征在于：所述的应用为在猪圆环病毒III型检测中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的应用包括以下步骤：
(1)用血清稀释液将待测血清样品稀释，将PCV3标准阳性血清、PCV3标准阴性血清、稀释后的待检血清样品各100μL/孔加到前述酶标板中，23～28℃孵育1h；
(2)用洗涤液洗板，300μL/孔，洗3～5次；
(3)每孔加入100μL酶标二抗，23～28℃孵育30分钟；
(4)用洗涤液洗板，300μL/孔，洗3～5次；
(5)取底物显色液A和底物显色液B等体积混匀，每孔加100μL，在暗处显色15分钟；
(6)每孔加入50μL的终止液终止反应；
(7)在波长为450nm处测OD值；
(8)结果判读：OD450nm(样本)≥0.4判为阳性，OD450nm(样本)＜0.2判为阴性，当0.2≤OD450nm(样本)＜0.4判为可疑。
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