[发明专利]一种新型猪圆环病毒3型的ELISA抗体检测试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种新型猪圆环病毒3型的ELISA抗体检测试剂盒及其应用。本发明的试剂盒组成包括：以重组PCV3 Cap蛋白作为包被抗原的酶标板、PCV3标准阳性血清、PCV3标准阴性血清、酶标二抗、洗涤液、血清稀释液、底物显色液A、底物显色液B和终止液；首次成功研制针对猪圆环病毒III型的新型PCV3 ELISA抗体检测试剂盒。本发明的试剂盒具有很好特异性和灵敏性，检测时间短，可同时检测大量样品；试剂盒保存时间长，稳定性好，为该病的诊断、检测和监测等提供了有力的工具。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，特别涉及一种新型猪圆环病毒3型的ELISA抗体检测试剂盒及其应用。

背景技术

圆环病毒属于圆环病毒科圆环病毒属，其基因组为一个2kb左右的环状单链DNA。圆环病毒可以感染多种动物，包括猪、犬、鸭、鸡、狐狸和鱼类。圆环病毒主要编码两个开放性阅读框(rep和cap)。众所周知，有两个圆环病毒可以感染猪。猪圆环病毒2型(PCV2)感染可以导致不同的临床疾病，对养猪业造成严重的经济损失，而圆环病毒1型(PCV1)不引起临床疾病。2015年，美国研究人员通过宏基因组测序，在美国检测到一个新型圆环病毒(PCV3)，该圆环病毒与皮炎肾病综合征、繁殖障碍、心肌炎以及多系统炎症相关。PCV3属于新发猪重大疫病病原，2016年12月首次出现在中国，该病与仔猪多系统衰竭症以及母猪流产有关，正给猪养殖业带来严重威胁。2016年12月，华南农业大学宋长绪研究员组在我国首次检出致病性的新型猪圆环病毒—PCV3-China/GD2016病毒株，通过对PCV3毒株全基因组和其部分基因的遗传进化研究发现，PCV3与PCV1和PCV2处于不同的进化分支(图1)，属于新型的猪圆环病毒(Genome characterization of a porcine circovirus type 3in SouthChina,Changxu Song,Transbound Emerg Dis.2017Mar 13.)。猪圆环病毒III型是严重危害我国养猪业的一个猪病，抗体检测是防控的关键，然而目前国内外尚无成熟的、商品化的PCV3的ELISA抗体检测试剂盒。

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种新型猪圆环病毒3型的ELISA抗体检测试剂盒。本发明以重组PCV3抗原(PCV3的Cap蛋白)为基础，研制灵敏度高、特异性和稳定性好的ELISA抗体检测试剂盒，可用于PCV3病毒抗体的快速检测。

本发明的又一目的在于提供所述的新型猪圆环病毒3型的ELISA抗体检测试剂盒的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种新型猪圆环病毒3型的ELISA抗体检测试剂盒，包括：以重组PCV3Cap蛋白作为包被抗原的酶标板。

所述的新型猪圆环病毒3型的ELISA抗体检测试剂盒还包括：PCV3标准阳性血清、PCV3标准阴性血清、酶标二抗、洗涤液、血清稀释液、底物显色液A、底物显色液B和终止液中的一种或至少两种。

所述的重组PCV3Cap蛋白具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。

所述的重组PCV3Cap蛋白来自于猪圆环病毒3型核衣壳蛋白，特别是来自于猪圆环病毒PCV3-China/GD2016病毒株。

编码所述的重组PCV3Cap蛋白的核苷酸序列，如SEQ ID NO.2所示。

所述的重组PCV3Cap蛋白通过以下步骤制备得到：

将编码所述的重组PCV3Cap蛋白的核苷酸序列克隆入表达载体构建重组表达载体；将所述重组表达载体转入表达系统中进行表达，纯化，得到所述的重组PCV3Cap蛋白。