[发明专利]衍生化HPLC‑DAD法测定药物或其合成中间体中酰氯的方法

说明书

技术领域

本发明属于药品分析检测领域，涉及一种衍生化HPLC-DAD法测定酰氯的方法，尤其涉及衍生化HPLC-DAD法测定药物或其合成中间体中酰氯的方法。

背景技术

近几年来，药物中的基因毒性杂质(Genotoxic impurities，GTIs)由于对人类存在潜在的致癌性而受到广泛重视，需要将其控制在一个安全水平^[1]。气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)或者毛细管电泳色谱法(CE)法与质谱(MS)联用技术在基因毒性杂质分析中发挥着重要的作用^[2-3]。有些分析策略如化学衍生化^[4]可以提高分析物的可检测性，或者实验的设计(DoE)^[5]可以协助进行方法条件的系统优化。酰氯是药物合成中重要的酰化试剂^[6-12]。例如，乙酰氯和2-氯丙酰氯是可用于合成布洛芬；氯乙酰氯常用于他达拉非的制备；5-氯噻吩-2-甲酰氯是合成利伐沙班的重要中间体等。尽管有文献质疑酰氯引起基因突变的可能性^[13]，但是监管机构对药物中残留酰氯的监测仍然十分重视^[14]。因此需要建立一种专属性强、灵敏度高的方法对药物中的这类杂质进行监控。

一般来说，由于酰氯非常活泼，直接用HPLC法或GC法分析往往会产生错误的结果。因此常采用衍生化方法用于检测酰氯。水是检测酰氯常用的衍生化试剂之一，酰氯和水衍生化后产物通过CE^[14]或者HPLC-MS^[15]进行分析，但是水解法不能区分酰氯和药物本身存在的相应的羧酸，导致测定的结果偏高^[16]。文献也曾报道用GC-MS^[17]或者GC-FID^[18]法对酰氯进行甲醇衍生化后检测，但是该方法常常会受到水分的竞争，并且反应速率慢，需要催化剂。而且这两种方法在非质子性溶剂中的回收率都比较差^[16]。酰氯和碱性化合物的反应速率高于酰氯和水或者醇类的反应速率，氨基或肼基为常见的碱性基团，申请人尝试选择含有此两种基团的化合物进行衍生化测定。

在各种分离分析方法中，HPLC-DAD方法因其简单实用而成为了大多数实验室的首选方法，但是由于大多数药物及其合成中间体有较强的紫外吸收，因此专属性不足是该法的主要缺陷。申请人通过对氨基取代化合物或肼基取代化合物与酰氯衍生化产物的紫外吸收光谱比较，发现硝基苯肼类衍生化试剂与酰氯衍生化反应后生成的产物可以避免药物及其合成中间体的基质干扰，进一步通过衍生化条件优化，发明了一种衍生化HPLC-DAD法测定药物或其合成中间体中酰氯的方法。

发明内容

本发明的不足是针对现有技术的不足，提供衍生化HPLC-DAD法测定酰氯的方法。

本发明的另一个目的是提供衍生化HPLC-DAD法测定药物或其合成中间体中酰氯的方法。

本发明的目的可通过如下技术方案实现：

衍生化HPLC-DAD法测定酰氯的方法，包含以下步骤：

(1)、在室温下，使用硝基苯肼衍生化试剂对酰氯衍生化生成在紫外可见光区(320～450nm)内有较强吸收的产物；

(2)、以步骤(1)中衍生化反应产物，利用HPLC反相分配色谱法在紫外可见光区(320～450nm)测定其中酰氯的衍生化产物，从而实现对酰氯的定性或定量检测。

优选的，所述的衍生化HPLC-DAD法测定酰氯的方法，包含以下步骤：

(1)、在常温下，以乙腈为反应体系，使用硝基苯肼类衍生化试剂对酰氯衍生化反应生成在紫外可见光区(330～420nm)有较强的吸收的产物；

(2)、以步骤(1)中衍生化反应产物，利用HPLC-DAD法，基于反相分配色谱法原理在紫外可见光区(330～420nm)测定其中酰氯的衍生化产物，从而实现对酰氯的定性或定量检测。

所述的酰氯包括脂肪族酰氯或芳香族酰氯，如所示，R选自取代或未取代的C1～C6烷基、含有S、N、O的取代或未取代的五到九元杂环、取代或未取代的苯环、萘环、蒽环、菲环；其中，C1～C6烷基的取代基为卤素如氯、溴；杂环或苯环、萘环、蒽环、菲环的取代基为氯、溴、硝基、氨基、取代或未取代的C1～C6烷基、取代或未取代的C1～C4烷氧基，烷基或烷氧基的取代基为卤素。