[发明专利]一种快速检测褐飞虱对苯基吡唑类杀虫剂抗药性的方法有效
| 申请号： | 201710186158.6 | 申请日： | 2017-03-21 |
| 公开（公告）号： | CN107475360B | 公开（公告）日： | 2021-04-16 |
| 发明（设计）人： | 刘泽文;张懿熙;刘美玲 | 申请（专利权）人： | 南京农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6844 | 分类号： | C12Q1/6844;C12Q1/6888 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 孙斌 |
| 地址： | 21009*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 快速 检测 褐飞虱 苯基 吡唑 杀虫剂 抗药性 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种基于环介导恒温扩增技术LAMP的褐飞虱对苯基吡唑类杀虫剂抗药性快速分子检测方法，其特征在于如下步骤实现：
（1）提取单头褐飞虱2-3龄若虫基因组DNA；
（2）LAMP反应体系 2.5 μL 10×Isothermal Amplification Buffer，8 U Bst 2.0DNA polymerase，1 μL单头褐飞虱基因组DNA，终浓度0.25 mmol/L的dNTPs、1 mmol/L的MgSO4、0.2 μmol/L的外引物、1.2 μmol/L内引物、0.6 mol/L的betaine、 羟基萘酚蓝HNB，加双蒸水至反应总体积为25 μL；其中所述的外引物F3：GTGACACGTGCAGGAAACT；B3：GGCGTTGGTGGATGACATG；内引物 FIP：AGCCCCGACGGAATGTAGATCT-GCGTGCGAGATCCAGTTC；BIP：TATCGTGGGTCTCGTTCTGGCT-GTGGTGACGCCGAGTGAC；
（3）LAMP反应程序 64℃ 60-70 min；
（4）结果判定 反应结束后，反应液为天蓝色，说明样品为抗性个体；反应液仍为紫色，说明样品为敏感个体；
所述内引物、外引物根据Seq No.1设计得到。
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