[发明专利]一种应用高速逆流色谱分离猴头菌中黄酮类化合物的方法

权利要求书

1.一种应用高速逆流色谱分离猴头菌中黄酮类化合物的方法，其特征在于所述方法步骤如下：

A、猴头菌发酵菌丝体粗提物的制备：

取猴头菌发酵菌丝体，用乙醇或乙醇水溶液为提取剂提取，收集提取液，过滤，减压浓缩回收乙醇，得到乙醇提取物；将乙醇提取物依次通过石油醚萃取取石油醚层，再以乙酸乙酯萃取取乙酸乙酯层，蒸馏挥去溶剂干燥后得到猴头菌发酵菌丝体粗提物；

B.高速逆流色谱法分离：

以氯仿、二氯甲烷、甲醇和水的混合液作为两相溶剂体系，充分混合后静置分层，两相分离后超声脱气，上相作为固定相，下相作为流动相；将固定相充满高速逆流色谱仪的色谱柱，设定高速逆流色谱仪，在900～1000r/min转速下，水浴温度为15～25℃的条件下，以2～3ml/min的流速注入流动相，至两相溶剂在柱中达到平衡状态，用上相、下相体积比为1:1的混合溶剂溶解猴头菌发酵菌丝体粗提物，制备得样品溶液进样，以波长为254nm的紫外检测器检测，根据紫外检测器光谱图的峰形收集流出液，将收集到的流出液用高效液相色谱进行检测，将出峰及保留时间相同的流出液合并，浓缩后冷冻干燥，得到目标产物黄酮类化合物，所述的黄酮类化合物为金雀异黄酮；

所述两相溶剂体系中氯仿：二氯甲烷：甲醇：水的体积比为4～6:2～4:3～5:2～3。

2.如权利要求1所述的应用高速逆流色谱分离猴头菌中黄酮类化合物的方法，其特征在于：所述的乙醇水溶液中乙醇质量浓度为90～95％。

3.如权利要求1所述的应用高速逆流色谱分离猴头菌中黄酮类化合物的方法，其特征在于：所述两相溶剂体系中氯仿：二氯甲烷：甲醇：水的体积比为4:2:3:2。

4.如权利要求1所述的应用高速逆流色谱分离猴头菌中黄酮类化合物的方法，其特征在于：步骤A中所述提取剂的质量用量为所述猴头菌发酵菌丝体15-20倍。

5.如权利要求1所述的应用高速逆流色谱分离猴头菌中黄酮类化合物的方法，其特征在于：步骤A中所述乙醇提取的温度为30-35℃，提取次数为3次，每次提取时间为8-12h。

6.如权利要求1所述的应用高速逆流色谱分离猴头菌中黄酮类化合物的方法，其特征在于：步骤A中所述猴头菌发酵菌丝体为粉末状，粒度为100目。

7.如权利要求1所述的应用高速逆流色谱分离猴头菌中黄酮类化合物的方法，其特征在于：样品溶液中所述猴头菌发酵菌丝体粗提取物的用量以混合溶剂的体积计为10～25mg/mL。

8.如权利要求1所述的应用高速逆流色谱分离猴头菌中黄酮类化合物的方法，其特征在于：步骤B中所述流动相流速为2mL/min。

9.如权利要求1所述的应用高速逆流色谱分离猴头菌中黄酮类化合物的方法，其特征在于：所述步骤B中采用高效液相色谱法测定的色谱条件为：色谱柱为XTerra MS C18，5μm×4.6×250mm；流动相：A为乙腈，B为水；梯度洗脱；洗脱程序：0min，B为30％；0～10min，B为30％～60％；10～20min，B为60％～90％；20～25min，90％～60％；25～30min，60％～30％；流速1mL/min；柱温：30℃；检测波长254nm；进样量10μL。