[发明专利]核酸扩增反应方法、核酸扩增反应装置以及核酸扩增反应用试剂在审

申请号：	201710191715.3	申请日：	2017-03-28
公开（公告）号：	CN107236789A	公开（公告）日：	2017-10-10
发明（设计）人：	上原雅行	申请（专利权）人：	精工爱普生株式会社
主分类号：	C12Q1/68	分类号：	C12Q1/68;C12M1/00
代理公司：	北京集佳知识产权代理有限公司11227	代理人：	李洋,青炜
地址：	日本***	国省代码：	暂无信息
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摘要：
搜索关键词：	核酸扩增反应方法装置以及应用试剂
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【说明书】：

技术领域

本发明涉及核酸扩增反应方法、核酸扩增反应装置以及核酸扩增反应用试剂。

背景技术

近年来，随着基因的利用技术的发展，基因诊断、基因治疗等利用了基因的医疗备受注目，除此之外在农业、畜牧业领域中，在品种辨别、品种改良中使用了基因的方法也被较多地开发。作为用于利用基因的技术，PCR(Polymerase Chain Reaction：聚合酶链反应)法等技术广泛普及。今天，PCR法在生物体物质的信息解析中成为必不可缺的技术。

PCR法是对包含成为扩增的对象的核酸(靶核酸)以及试剂的溶液(反应液)实施热循环，从而使靶核酸扩增的方法。热循环是使两个阶段以上的温度周期性地施加于反应液的处理。在PCR法中，通常实施两个阶段或者三个阶段的热循环的方法。

例如，在专利文献1中记载了一种核酸扩增反应装置，其使填充有反应液(液滴)以及不与反应液混和且比重小于反应液的液体(油等)的反应容器绕旋转轴旋转，凭借比重差使反应液移动并进行热循环。在专利文献1中，为了检测核酸扩增，而使用荧光标志探针。

专利文献1：日本特开2012-115208号公报

然而，要求基于PCR的产物的生成时间的缩短化。然而，在专利文献1所记载的技术中，若使PCR的反应时间(改性反应用的时间、退火反应/伸长反应用的时间)缩短(若使PCR高速化)，则例如存在核酸与荧光标志探针不充分地混合(Hybridization)，从而无法高灵敏度地检测核酸的扩增的情况。

发明内容

本发明的几个方式的目的之一在于提供一种即使使PCR高速化，也能够高灵敏度地检测核酸的扩增的核酸扩增反应方法。另外，本发明的几个方式的目的之一在于提供一种即使使PCR高速化，也能够高灵敏度地检测核酸的扩增的核酸扩增反应装置。另外，本发明的几个方式的目的之一在于提供一种即使使PCR高速化，也能够高灵敏度地检测核酸的扩增的核酸扩增反应用试剂。

本发明的核酸扩增反应方法包含对包含核酸的扩增所使用的核酸扩增反应试剂的反应液施加用于使上述核酸扩增的热循环的工序，

在上述热循环中，退火反应以及伸长反应用的加热时间为1秒以上10秒以下，

上述核酸扩增反应试剂包含正向引物、反向引物、聚合酶以及荧光标志探针，

包含于上述反应液的上述正向引物的浓度为0.4μM以上3.2μM以下，

包含于上述反应液的上述反向引物的浓度为0.4μM以上3.2μM以下，

包含于上述反应液的上述聚合酶的量为0.5U以上4U以下，

包含于上述反应液的上述荧光标志探针的浓度为0.15μM以上1.2μM以下。

在上述的核酸扩增反应方法中，即使使PCR高速化，也能够高灵敏度地检测核酸的扩增(详细参照后述的“4.实验例”)。

在本发明的核酸扩增反应方法中，

上述核酸扩增反应试剂也可以包含dNTP，

包含于上述反应液的上述dNTP的浓度为0.125mM以上1mM以下。

在上述的核酸扩增反应方法中，即使使PCR高速化，也能够更加可靠且高灵敏度地检测核酸的扩增。