[发明专利]一种γ-L-谷氨酰正丁胺的酶法转化制备方法

权利要求书

1.一种γ-L-谷氨酰正丁胺的酶法转化制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将具有γ-谷氨酰转肽酶活性的菌株在培养基中培养发酵，发酵液离心后得到含γ-谷氨酰转肽酶的湿菌体；

(2)将上述制备的湿菌体加入转化液中，所述转换液包括：L-谷氨酸-γ-甲酯、正丁胺，还包括3-甲氧基丁基乙酸酯、乙酸丁酯、戊醇、正己醇中的一种；

(3)在35-50℃，pH 6-11条件下进行酶促反应，再采用等电点结晶法分离得到γ-L-谷氨酰正丁胺；

所述步骤(1)中培养基的配方为：碳源物质、氮源物质、2.0g/L柠檬酸、2.5g/L硫酸铵、5.0g/L K₂HPO₄、2.5g/L MgSO₄、0.07g/L CaCl₂、0.002g/L CoCl₂和0.0001g/L MnC₄H₆O₄·4H₂O；

所述碳源物质的总碳源质量浓度为10-45g/L，且具体为葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、果糖中的一种或多种；

所述氮源物质的总氮源质量浓度为5-40g/L，且具体为牛肉膏、酵母膏、玉米浆、蛋白胨、豆饼水解液中的一种或多种；

所述步骤(1)中具有γ-谷氨酰转肽酶活性的菌株具体为大肠杆菌ATCC15489、铜绿假单胞菌CGMCC NO：1.1129、枯草芽孢杆菌CGMCC NO:1.1628中的一种；

所述步骤(2)中L-谷氨酸-γ-甲酯、正丁胺的浓度分别为5-80g/L、10-120g/L；

所述步骤(2)中3-甲氧基丁基乙酸酯、乙酸丁酯、戊醇、正己醇的浓度为0.001-5.0g/L；

所述步骤(3)中采用等电点结晶法分离得到γ-L-谷氨酰正丁胺的具体方法为：

a.将酶促反应后的转化液于3000-5000r/min环境下离心10-20min，去除菌体细胞；

b.加热转化液，再进行脱色、抽滤处理，并将脱色液进一步地通过离子交换树脂柱吸附，用2-4％氨水洗脱，收集洗脱液；

c.调至pH 3-4，静置析出沉淀，真空抽滤，烘干得γ-L-谷氨酰正丁胺粗品；

d.采用乙醇洗涤，真空抽滤，烘干得γ-L-谷氨酰正丁胺精品。

2.根据权利要求1所述的γ-L-谷氨酰正丁胺的酶法转化制备方法，其特征在于，所述脱色处理具体为活性碳脱色处理。

3.根据权利要求1所述的γ-L-谷氨酰正丁胺的酶法转化制备方法，其特征在于，所述离子交换树脂柱具体为732型阳离子交换树脂柱。