[发明专利]一种γ-L-谷氨酰正丁胺的酶法转化制备方法

说明书

本发明公开了一种γ‑L‑谷氨酰正丁胺的酶法转化制备方法，包括如下步骤：(1)将具有γ‑谷氨酰转肽酶活性的菌株在培养基中培养发酵，发酵液离心后得到含γ‑谷氨酰转肽酶的湿菌体；(2)将上述湿菌体中加入转化液，所述转换液包括：L‑谷氨酸‑γ‑甲酯、正丁胺以及3‑甲氧基丁基乙酸酯、乙酸丁酯、戊醇、正己醇中的一种；(3)在35‑50℃，pH 6‑11条件下进行酶促反应，再采用等电点结晶法分离得到γ‑L‑谷氨酰正丁胺。本发明的优点在于：提供了一种反应条件温和、酶立体选择性强、催化效率高、成本低、工艺流程简单的γ‑L‑谷氨酰正丁胺的酶法转化制备方法。

技术领域

本发明涉及γ-L-谷氨酰正丁胺的转化方法，尤其涉及一种γ-L-谷氨酰正丁胺的酶法转化制备方法。

背景技术

γ-L-谷氨酰正丁胺是一种重要的γ-谷氨酰烷基胺，γ-谷氨酰烷基胺都可以促进T细胞的增加，从而增加免疫力。γ-L-谷氨酰正丁胺可用于医药领域，具有非常广泛的应用前景。

γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyltranspeptidase，GGT，EC 2.3.2.2)是一种异源二聚体蛋白，由大、小2个亚基组成，催化反应的受体是氨基酸(或肽)时，形成γ-谷氨酰氨基酸或肽；γ-谷氨酰是供体又是受体时，进行自身转肽反应；亲核试剂是水时，进行水解反应。

目前利用γ-谷氨酰转肽酶催化合成γ-D-谷氨酰-L-色氨酸、谷胱甘肽、茶氨酸、γ-谷氨酰-牛磺酸等化合物的应用及报道很多，却尚未有利用该酶制备γ-L-谷氨酰正丁胺的报道。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种反应条件温和、酶立体选择性强、催化效率高、成本低、工艺流程简单的γ-L-谷氨酰正丁胺的酶法转化制备方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：一种γ-L-谷氨酰正丁胺的酶法转化制备方法，包括如下步骤：

(1)将具有γ-谷氨酰转肽酶活性的菌株在培养基中培养发酵，发酵液离心后得到含γ-谷氨酰转肽酶的湿菌体；

(2)将上述湿菌体中加入转化液，所述转换液包括：L-谷氨酸-γ-甲酯、正丁胺以及3-甲氧基丁基乙酸酯、乙酸丁酯、戊醇、正己醇中的一种；

(3)在35-50℃，pH 6-11条件下进行酶促反应，再采用等电点结晶法分离得到γ-L-谷氨酰正丁胺。

作为本发明的优选方式之一，所述步骤(1)中具有γ-谷氨酰转肽酶活性的菌株具体为大肠杆菌ATCC15489、铜绿假单胞菌CGMCC NO：1.1129、施氏假单胞菌CGMCC NO:1.202、枯草芽孢杆菌CGMCC NO:1.1628中的一种。

作为本发明的优选方式之一，所述步骤(1)中培养基的配方为：碳源物质、氮源物质、2.0g/L柠檬酸、2.5g/L硫酸铵、5.0g/L K₂HPO₄、2.5g/L MgSO₄、0.07g/L CaCl₂、0.002g/LCoCl₂和0.0001g/L MnC₄H₆O₄·4H₂O。

作为本发明的优选方式之一，所述碳源物质的总碳源质量浓度为10-45g/L，且具体为葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、果糖中的一种或多种。

作为本发明的优选方式之一，所述氮源物质的总氮源质量浓度为5-40g/L，且具体为牛肉膏、酵母膏、玉米浆、蛋白胨、豆饼水解液中的一种或多种。

作为本发明的优选方式之一，所述步骤(2)中L-谷氨酸-γ-甲酯、正丁胺的浓度分别为5-80g/L、10-120g/L。