[发明专利]一种静注呼吸道合胞病毒人免疫球蛋白及其制备方法

权利要求书

1.一种静注呼吸道合胞病毒人免疫球蛋白，其特征在于，该静注呼吸道合胞病毒人免疫球蛋白其中和抗体效价不小于1：3000，纯度大于等于98％，蛋白含量为40～60mg/ml。

2.根据权利要求1所述的一种静注呼吸道合胞病毒人免疫球蛋白，其特征在于，剂型为液体制剂，剂型规格为50ml/瓶或100ml/瓶。

3.如权利要求1所述的一种静注呼吸道合胞病毒人免疫球蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)微量中和试验法筛选RSV中和抗体效价大于等于1：300的原料血浆；

(2)将筛选出的原料血浆混合制备成血浆供试品，所述血浆供试品的RSV中和抗体效价滴度大于等于1：600；

(3)将所述血浆供试品按照低温乙醇工艺蛋白分离方法，分离提取免疫球蛋白组份，经压滤、层析、超滤、低pH孵育灭活、配制后分装得到产品。

4.根据权利要求3所述的一种静注呼吸道合胞病毒人免疫球蛋白的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述微量中和试验法具体包括如下步骤：

①样品稀释

将血浆样本用细胞维持液预先进行1：10稀释后56℃灭活30分钟；在96孔深孔板中加入540ul细胞维持液，然后加入灭活后的血浆样本60ul，震荡混匀备用；

打开足够量的96孔细胞板，标明病毒回滴用板和样品试验板，并在各样品试验板上标示该板试验样品的编号；

在样品试验板的各样品孔中加入33.3ul细胞维持液,病毒回滴孔与阴性对照孔加入50ul细胞维持液；

将预先稀释好的样品液分别加入到相应96孔细胞板的相应位置，每孔加样品16.7μl，每个样品平行做四孔；

②攻击病毒

制备攻击病毒液：根据试验的标本数用维持液制备足量的攻击病毒液，将应用病毒稀释到100CCID₅₀/0.05ml；除病毒回滴孔与阴性对照孔外，其余各孔中均加入50μl含100CCID₅₀的攻击病毒液；

回滴100CCID50攻击病毒液：用细胞维持液将攻击病毒液作10^-1、10^-2、10^-3稀释，将其攻击病毒液与其10^-1、10^-2、10^-3浓度的病毒液加入到相应的病毒回滴用96孔细胞板孔中，每个稀释度加10孔，50μl/孔；阴性对照：向阴性对照各孔中再加入50μl细胞维持液；

将所有96孔细胞板放入35℃、含有CO₂体积百分数为5％的培养箱中和培养1.5小时；

③细胞悬液的配制与添加

细胞悬液的配制：取足够量的Hep-2细胞，消化后计数，试验用细胞悬液浓度应为2×10⁵个/ml，配好的细胞液立即使用；

细胞悬加：中和培养后每孔加细胞悬液100μl，约2×10⁴个/孔；

④培养及观察统计

将完成以上操作的96孔细胞板放置35℃、含有CO₂体积百分数为5％的培养箱中培养7天，第5～7天显微镜下观察样品保护细胞感染病毒的情况，记录统计；

四个重复样品孔中有两孔及以上不发生病变者即为高效价血浆。

5.根据权利要求4所述的一种静注呼吸道合胞病毒人免疫球蛋白的制备方法，其特征在于，所述细胞维持液为体积比为3％的胎牛血清的MEM液。

6.根据权利要求3所述的一种静注呼吸道合胞病毒人免疫球蛋白的制备方法，其特征在于，步骤(2)为，取经步骤(1)中和试验法测定的中和抗体效价大于1：300的人血浆，2～30℃下融浆，合并混合制备成血浆供试品。