[发明专利]一种静注呼吸道合胞病毒人免疫球蛋白及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及人免疫球蛋白及其制备方法技术领域，特别是涉及一种静注呼吸道合胞病毒人免疫球蛋白及其制备方法。

背景技术

呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus，RSV)为副粘病毒科,肺炎病毒属,是有包膜的单链负链RNA病毒。RSV病毒是儿童呼吸道感染最重要的病毒病原,其早期感染症状与许多病原类似，严重危害儿童健康。RSV感染是冬春季婴幼儿住院的主要原因之一。据WHO报告，全球每年大约有6400万人感染RSV，其中死亡16万。最新的一项研究表明，每年的11月至次年4月，5岁以内因急性呼吸道感染住院的患儿中20％与RSV感染有关。RSV感染发病呈全球性，局部可暴发流行，已成为世界性的公共卫生问题。呼吸道合胞病毒人免疫球蛋白RSV-IgG因能特异中和呼吸道合胞病毒，临床上主要用其降低高危人群的住院率，包括小于6周龄婴儿、1岁以内早产儿、2岁以内患有支气管肺发育不良或患先天性心脏病的幼儿、老人及免疫抑制病人。普通人群中的呼吸道合胞病毒自然感染率可达90％以上，筛选并采集含高效价呼吸道合胞病毒IgG抗体的血浆，采用高效的分离纯化方法制备呼吸道合胞病毒人免疫球蛋白药物，对于预防因呼吸道合胞病毒引起的重症感染具有不可替代的临床应用价值。

发明内容

本发明就是针对上述存在的缺陷而提供一种静注呼吸道合胞病毒人免疫球蛋白及其制备方法，可以有效预防因呼吸道合胞病毒感染诱发的婴幼儿呼吸道感染。

本发明的一种静注呼吸道合胞病毒人免疫球蛋白及其制备方法技术方案为，该静注呼吸道合胞病毒人免疫球蛋白其中和抗体效价不小于1：3000，纯度大于等于98％，蛋白含量为40～60mg/ml。

该静注呼吸道合胞病毒人免疫球蛋白剂型为液体制剂，剂型规格为50ml/瓶或100ml/瓶。

所述的一种静注呼吸道合胞病毒人免疫球蛋白的制备方法，包括以下步骤：

(1)微量中和试验法筛选RSV中和抗体效价大于等于1：300的原料血浆；

(2)将筛选出的原料血浆混合制备成血浆供试品，所述血浆供试品的RSV中和抗体效价滴度大于等于1：600；

(3)将所述血浆供试品按照低温乙醇工艺蛋白分离方法，分离提取免疫球蛋白组份，经压滤、层析、超滤、低pH孵育灭活、配制后分装得到产品。

步骤(1)中所述微量中和试验法具体包括如下步骤：

①样品稀释

将血浆样本用细胞维持液预先进行1：10稀释后56℃灭活30分钟；在96孔深孔板中加入540ul细胞维持液，然后加入灭活后的血浆样本60ul，震荡混匀备用；

打开足够量的96孔细胞板，标明病毒回滴用板和样品试验板，并在各样品试验板上标示该板试验样品的编号；

在样品试验板的各样品孔中加入33.3ul细胞维持液,病毒回滴孔与阴性对照孔加入50ul细胞维持液；

将预先稀释好的样品液分别加入到相应96孔细胞板的相应位置，每孔加样品16.7μl，每个样品平行做四孔；

②攻击病毒

制备攻击病毒液：根据试验的标本数用维持液制备足量的攻击病毒液，将应用病毒稀释到100CCID₅₀/0.05ml；除病毒回滴孔与阴性对照孔外，其余各孔中均加入50μl含100CCID₅₀的攻击病毒液；

回滴100CCID50攻击病毒液：用细胞维持液将攻击病毒液作10^-1、10^-2、10^-3稀释，将其攻击病毒液与其10^-1、10^-2、10^-3浓度的病毒液加入到相应的病毒回滴用96孔细胞板孔中，每个稀释度加10孔，50μl/孔；

阴性对照：向阴性对照各孔中再加入50μl细胞维持液；

将所有96孔细胞板放入35℃、含有CO₂体积百分数为5％的培养箱中和培养1.5小时；

③细胞悬液的配制与添加

细胞悬液的配制：取足够量的Hep-2细胞，消化后计数，试验用细胞悬液浓度应为2×10⁵个/ml，配好的细胞液立即使用；

细胞悬加：中和培养后每孔加细胞悬液100μl，约2×10⁴个/孔；

④培养及观察统计